[發(fā)明專利]一種檢測(cè)AcVA、AcVB、CMV和AcCRaV四種獼猴桃病毒的引物和試劑盒

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010324695.4
• 申請(qǐng)日: 2020-04-23
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111363853B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-07-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 尚靜;薛冰;張敏;賈琦;龔國(guó)淑;陳華保
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): C12Q1/70
• 分類號(hào): C12Q1/70;C12Q1/686;C12N15/11
• 代理公司: 北京正華智誠(chéng)專利代理事務(wù)所(普通合伙) 11870
• 代理人: 李夢(mèng)蝶

本發(fā)明公開(kāi)了一種檢測(cè)AcVA、AcVB、CMV和AcCRaV四種獼猴桃病毒的引物和試劑盒。引物包括配合使用的體系Ⅰ和體系Ⅱ；體系Ⅰ和體系Ⅱ中至少一組體系包括如SEQ ID NO.1～2和SEQ ID NO.3～4所示的引物；同時(shí)，體系Ⅰ和體系Ⅱ分別包括如SEQ ID NO.5～6或SEQ ID NO.7～8所示的引物，且體系Ⅰ和體系Ⅱ含有的引物不同。本發(fā)明通過(guò)設(shè)計(jì)兩組引物體系，通過(guò)一批次的檢測(cè)就能夠有效的將AcVA、AcVB、CMV和AcCRaV四種獼猴桃病毒完全的檢測(cè)出來(lái)，同時(shí)還能夠避免引物之間的相互干擾。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于基因工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種檢測(cè)AcVA、AcVB、CMV和 AcCRaV四種獼猴桃病毒的引物、試劑盒以及檢測(cè)方法。

背景技術(shù)

植物病毒是一種由核酸和蛋白質(zhì)組成的具有侵染活性的細(xì)胞內(nèi)寄生病原物，據(jù)國(guó)際病毒分類委員會(huì)(ICTV)的第八次報(bào)告，目前全世界發(fā)現(xiàn)的植物病毒種類達(dá)1122個(gè)。植物病毒所引起的植物病害素有“植物癌癥”之稱，其對(duì)農(nóng)作物的危害程度僅次于真菌病原物，幾乎每種農(nóng)作物都受到2～3種病毒的危害。全世界每年由植物病毒造成的損失約4百億美元，僅煙草花葉病毒 (Tobacco mosaic virus,TMV)造成的危害就超過(guò)1億美元。

獼猴桃是全球重要的園藝產(chǎn)品之一，因其果肉含有豐富的維生素C、礦物質(zhì)及膳食纖維，深受大眾的青睞。2017年，世界獼猴桃產(chǎn)量已達(dá)到403萬(wàn)噸，但病害的侵染會(huì)影響獼猴桃的產(chǎn)量和質(zhì)量，甚至影響獼猴桃產(chǎn)業(yè)的健康發(fā)展。病毒病是一種潛伏期長(zhǎng)、在生產(chǎn)上存在巨大隱患的病害。而獼猴桃褪綠環(huán)斑相關(guān)病毒(Actinidia chlorotic ringspotsassociated virus,ACRaV)、黃瓜花葉病毒病 (Cucumber mosaic virus,CMV)、獼猴桃病毒A(Actinidia virus A,AcVA)、獼猴桃病毒B(Actinidia virus B，AcVB)均能在自然條件下該病毒可侵染獼猴桃，對(duì)果樹(shù)和獼猴桃的正常生長(zhǎng)發(fā)育產(chǎn)生一定的影響。同時(shí)，我國(guó)在湖北，陜西，四川等地區(qū)的獼猴桃栽品種中均有檢測(cè)到該病毒。但目前未見(jiàn)能夠同時(shí)對(duì)4種病毒進(jìn)行檢測(cè)，且引物相互之間不會(huì)存在干擾的報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)中的上述不足，本發(fā)明提供一種檢測(cè)AcVA、AcVB、CMV和AcCRaV四種獼猴桃病毒的引物和試劑盒，能夠檢測(cè)出AcVA、AcVB、CMV和 AcCRaV四種獼猴桃病毒，且引物特異性好，靈敏度高。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明解決其技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案是：

一種檢測(cè)AcVA、AcVB、CMV和AcCRaV四種獼猴桃病毒的引物，包括配合使用的體系Ⅰ和體系Ⅱ；體系Ⅰ和體系Ⅱ中至少一組體系包括如SEQ ID NO.1～2和SEQ ID NO.3～4所示的引物；

同時(shí)，體系Ⅰ和體系Ⅱ均還包括如SEQ ID NO.5～6或SEQ ID NO.7～8所示的引物；且SEQ ID NO.5～6和SEQ ID NO.7～8所示的引物不同時(shí)出現(xiàn)在體系Ⅰ和體系Ⅱ中；即體系Ⅰ中含有SEQ ID NO.5～6所示引物時(shí)，體系Ⅱ中就不會(huì)有 SEQ ID NO.5～6所示引物，而是含有SEQ ID NO.7～8所示的引物。

引物具體序列如下所示：

AcVB-F：5’-GTTTGCGAGGAGACGTAGGGC-3’(SEQ ID NO.1)；

AcVB-R：5’-AGTTAAGTGCTCTYGGRGGTGTG-3’(SEQ ID NO.2)；

CMV-F：5’-GCCGCCATCTCTGCTATGTT-3’(SEQ ID NO.3)；

CMV-R：5’-GAATGCGTTGGTGCTCGATG-3’(SEQ ID NO.4)；

AcVA-F：5’-CATGGCAAAGAATATCTCAAG-3’(SEQ ID NO.5)；