[發明專利]分子標志物5-tRF-His、乳腺癌檢測試劑盒及其應用

有效

• 申請號: 202010324556.1
• 申請日: 2020-04-23
• 公開（公告）號: CN111534587B
• 公開（公告）日: 2023-06-09
• 發明（設計）人: 湯珣;嚴楓
• 申請（專利權）人: 江蘇省腫瘤醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11;A61K31/7105;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 陳風平

本發明公開了一種分子標志物5?tRF?His、乳腺癌檢測試劑盒及其應用。本發明的5?tRF?His可以作為檢測乳腺癌的分子標志物，5?tRF?His與乳腺癌的增殖、凋亡密切相關，用于診斷乳腺癌和預后判斷。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，特別涉及一種分子標志物5-tRF-His、乳腺癌檢測試劑盒及其應用。

背景技術

乳腺癌在女性惡性腫瘤中發病率位居第一位，死亡率位居第六位，嚴重危害人們的?健康和生活。盡管在藥物敏感性和外科技術上已有巨大的突破，但復發和轉移的頻繁發生，仍是晚期乳腺癌患者死亡的主要原因。目前臨床診斷乳腺癌的方法主要依賴于體格?檢查和影像學檢查，但這些方法對于早期乳腺癌的發現敏感性很低，常用來診斷乳腺癌?的血清標志物對早期診斷的敏感性和特異性均不理想。因此，深入理解乳腺癌的發生和?發展機制，積極篩選鑒定有效的診斷和預后標志物，對提高乳腺癌檢出率和治愈率具有?重要意義。

轉運RNA(tRNA)傳統意義上作為轉運核糖核酸至核糖體載體，是參與合成蛋白?質的重要分子，其經典的三葉草結構已有深入研究。但是tRNA在基因調控方面的功能?知之甚少。日前，以tRNA為前體，經酶剪切而成的tRFtiRNA(tRNA?fragmentstRNA?halves)引起廣泛關注。查閱相關文獻顯示，相關tRFtiRNA在腫瘤方面的研究剛剛起?步，具有類似于miRNA的調控功能，并能參與調控基因轉錄和翻譯，細胞增殖以及細?胞應激反應。有研究提示tiRNAs在鼠血清中穩定性表達，具有轉錄前抑制功能，可能?是一類新型信號分子。

tRF是在物種間高度保守的單鏈小RNA分子，長度在15-34個核苷酸序列之間，不具有編碼蛋白質的能力。根據在前體tRNA上不同的剪切位點，將切割產物分為以下幾?種：3’tRF、5’tRF、tiRNAs、tRNA?halves等。因與miRNAs長度類似，tRF已在多項研?究中顯示具有類似的調控靶基因mRNA的功能，可能對細胞起到關鍵的調節作用。因?此，從tRFtiRNA角度挖掘乳腺癌新型分子靶標并探討分子機制十分必要。

發明內容

發明目的：本發明提供了一種用于乳腺癌的診斷或預后判斷的分子標志物?5-tRF-His。本發明還提供了該5-tRF-His在診斷乳腺癌或預后判斷的試劑或試劑盒中的?用途以及檢測試劑或試劑盒。

技術方案：本發明第一方面提供了用于乳腺癌的診斷或預后判斷的分子標志物，所?述分子標志物為5-tRF-His，所述5-tRF-His的核苷酸序列如SEQ?ID?NO.1所示。

本發明第二方面提供了乳腺癌分子標志物用于制備診斷乳腺癌或預后判斷試劑或試?劑盒的用途，所述乳腺癌分子標志物為5-tRF-His，所述5-tRF-His核苷酸序列如SEQID?NO.1所示。

本發明第三方面提供了一種用于診斷乳腺癌或預后判斷的試劑或試劑盒，所述試劑?或試劑盒用于檢測血清中5-tRF-His表達水平。

上述用于診斷乳腺癌的試劑或試劑盒，所述試劑或試劑盒包含如SEQ?ID?NO.2所示?的引物1以及如SEQ?ID?NO.3所示的引物2。

進一步地，檢測5-tRF-His表達量的試劑盒(PCR試劑盒)。除了上述的引物探針，還包括PCR反應常用試劑，如Taq酶，逆轉錄酶，緩沖液，dNTPs，MgCl₂和DEPC?水等；還可以含有標準品和/或對照品。

所述引物1為PCR正向引物：5’-CAGTCCGACGATCTGCCG-3'(SEQ?ID?NO.2)；所?述引物2為PCR反向引物：5’-GCTCTTCCGATCTCTAACCACTAT-3'(SEQ?ID?NO.3)。

本發明第四方面還提供了一種用于檢測乳腺癌分子標志物的探針，所述探針包含如?SEQ?ID?NO.2所示的引物1以及如SEQ?ID?NO.3所示的引物2，所述乳腺癌分子標志物?為5-tRF-His。