[發明專利]一種低溫耐硫酸鹽的透明質酸裂解酶YNLX-HYL及其應用

有效

• 申請號: 202010323988.0
• 申請日: 2020-04-22
• 公開（公告）號: CN111394344B
• 公開（公告）日: 2022-07-12
• 發明（設計）人: 周峻沛;黃遵錫;張蕊;雷曦;韓楠玉;唐湘華;吳倩;慕躍林
• 申請（專利權）人: 云南師范大學
• 主分類號: C12N9/88
• 分類號: C12N9/88;C12N15/60;C12N15/70;C12N1/21;C12P19/26;C12R1/19
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 劉妮

本發明公開了一種低溫耐硫酸鹽的透明質酸裂解酶YNLX?HYL及其應用，其氨基酸序列如SEQ NO.1所示。透明質酸裂解酶YNLX?HYL具有以下性質：最適pH5.5，最適溫度35℃，在0℃、10℃和20℃分別具有10％、39％和55％的酶活，在高濃度(NH₄)₂SO₄和Na₂SO₄中具有良好的活性和穩定性，可裂解透明質酸鈉制備不飽和的透明質酸寡糖，不飽和的透明質酸寡糖具有良好的抗氧化性，可清除羥自由基、氮自由基、超氧陰離子自由基以及抗2,2'?聯氮雙(3?乙基苯并噻唑啉?6?磺酸)二銨鹽(ABTS)被氧化的能力。本發明的透明質酸裂解酶可應用于美容、醫藥、制革等行業。

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，具體涉及一種低溫耐硫酸鹽的透明質酸裂解酶YNLX-HYL及其應用。

背景技術

透明質酸又名玻尿酸，是一種天然存在于生物體內的糖胺聚糖。D-葡萄糖醛酸和N-乙酰-D-葡萄糖胺以β-1，3糖苷鍵相連構成二糖單元，該二糖單元再以β-1，4糖苷鍵連接形成的多糖即為透明質酸。

透明質酸酶能降解透明質酸。第一類透明質酸酶是透明質酸4-糖基水解酶(EC3.2.1.35)，通過水解1，4-糖苷鍵來降解透明質酸，以四糖分子為主要產物。第二類透明質酸酶是透明質酸3-糖基水解酶(EC 3.2.1.36)，通過水解1，3-糖苷鍵來降解透明質酸，以四糖和六糖分子為主要產物。第三類透明質酸酶是透明質酸裂解酶(EC 4.2.2.1)，通過β-消除機制降解透明質酸，生成不飽和透明質酸二糖(El-Safory et al.CarbohydratePolymers,2010,81:165–181.)。

透明質酸酶可應用于美容、醫藥、制革等行業中。例如，透明質酸酶可作為藥物注射添加劑以增強機體對藥物的吸收效率；在眼科手術中，透明質酸酶作為輔助劑可減少麻藥的使用量；透明質酸酶可作為藥物用于治療注射透明質酸的美容術后并發癥；透明質酸酶可作為加工皮革的酶，改進制革工藝，降低制革過程對環境的污染。

低溫酶可應用于低溫環境要求下的生物技術領域，可防止微生物的污染及減少高溫下底物降解導致的副產物，低溫反應相對高溫反應來說能耗更低(Cavicchioli etal.Microbial Biotechnology,2011,4(4):449–460.)。鹽對酶的性質能產生巨大的影響。在中性鹽中，酶會發生鹽析作用，導致大部分的酶在高鹽濃度下不具有良好的催化活性。鹽廣泛存在于在自然界和各種生產實踐中，包括污水、洗滌、制革、食品、造紙等，例如，在皮革軟化過程中，需要添加硫酸鈉。具有耐鹽性的酶可更好地應用于高鹽環境生物技術領域，在高鹽環境下反應還可以防止微生物的污染、節省滅菌等所消耗的能源(Madern etal.Extremophiles,2000,4:91–98)。因此，低溫耐硫酸鹽的透明質酸裂解酶在制革等行業中具有應用的優勢。

發明內容

本發明的目的是提供一種低溫耐硫酸鹽的透明質酸裂解酶YNLX-HYL及其應用。

本發明技術目的具體通過以下技術方案實現：

一種低溫耐硫酸鹽的透明質酸裂解酶YNLX-HYL，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本發明透明質酸裂解酶YNLX-HYL總共含799個氨基酸，理論分子量為88kDa，其中N端20個氨基酸為預測信號肽序列“MKKTNLAFSLLCLSMGSVHA”。與已實驗研究過功能的透明質酸裂解酶進行比對，透明質酸裂解酶YNLX-HYL與Streptococcus pneumoniae來源的透明質酸裂解酶(Genbank ID：CTD38391)具有最高的氨基酸序列一致性，僅為30.9％。