[發明專利]用于促進被引劑進入細胞的體外或離體方法

有效

• 申請號: 202010322857.0
• 申請日: 2012-10-11
• 公開（公告）號: CN111808886B
• 公開（公告）日: 2023-10-13
• 發明（設計）人: 利亞姆·古德;坎塔勒亞·金代亞;瓦倫蒂娜·格布爾契克
• 申請（專利權）人: 泰克里亞有限公司
• 主分類號: C12N15/87
• 分類號: C12N15/87
• 代理公司: 北京市磐華律師事務所 11336
• 代理人: 馮永貞

用于促進被引劑進入細胞的體外或離體方法，該被引劑為核酸或核酸類似物，該方法包括在聚六亞甲基雙胍(PHMB)的存在下在鹽的存在下將細胞暴露于該核酸或該核酸類似物的步驟，其中該核酸或該核酸類似物和該PHMB是納米顆粒形式的復合物的形式；其中該被引劑包括多肽、肽、小分子藥物、生物活性試劑或細胞成像探針/造影劑。

本申請是分案申請，其原申請的國際申請號為PCT/GB2012/052526，國際申請日是2012年10月11日，中國國家申請號為201280050149.X，進入中國的日期為2014年04月11日，發明名稱為“方法”。

本發明涉及用于促進試劑(agent)(例如核酸)進入細胞的方法和反應試劑(reagent)的領域。

核酸和其類似物在基礎研究以及預防性和治療性干預中有許多應用。然而，原核和真核細胞對于核酸/類似物通常是不可滲透的。通常核酸/類似物的攝取需要病毒或非病毒遞送載體，以激發它們的潛能(potential)。為了進行得有效，遞送載體/核酸或類似物的組合或復合必須克服許多挑戰，例如細胞外降解、細胞膜屏障的穿透(cell membranebarrier penetration) 和胞內釋放，同時使細胞毒性和抗原性最小化。許多原本很有用的多肽(例如蛋白質、肽)和其它生物活性分子也是細胞不可滲透的。例如許多化合物的活性在生化分析中比在細胞分析或活體內的活性要高。細胞活性的下降被認為是主要是由于向細胞內的遞送不良。

脂質轉染胺(lipofectamine)是廣泛使用的用于促進試劑(例如核酸) 進入細胞的試劑的實例。然而，脂質轉染胺被認為對特別是哺乳動物細胞有毒性作用，這可以例如使體外實驗難以評價且活體內實驗難以執行。

其它被提出的促入劑(entry-promoting agent)描述在例如WO 2009/015143(Biodegradable cationic polymer gene transfer compositions and methods ofuse)；WO 02/22174(作為生物相容性基因遞送劑的陽離子脂質聚合物(cationiclipopolymer as biocompatible gene delivery agent))； WO2010/086406(非病毒轉染劑)；US 5,958,894(兩親性雙胍衍生物)中。

需要替代性的促進進入的試劑(促入劑)，用于例如核酸和其它物質，當活性受限于較差的細胞進入時。本發明識別出了促進進入的試劑和方法。這樣的促進進入的試劑和方法被認為是有益于例如為特別是真核細胞提供良好的進入促進、較弱的抗原性、低成本和/或低毒性。這樣的促進進入的試劑和方法可能例如在諸如以下等領域是有用的：核酸/類似物的轉染，例如功能的研究；穩定細胞系的產生；基因沉默；和DNA疫苗。如本領域普通技術人員將容易理解的，這樣的促入劑和方法可能在相關的RNA干擾(RNAi)或其它反義技術中是有用的。遞送反應試劑或藥物至細胞中的的挑戰并不僅僅局限于核酸。蛋白質和肽通常也很難進入細胞，促入技術也是有用的。而且，許多被描述為小于1000克/摩爾的小分子也難以進入細胞，而通過改進的細胞遞送技術將會提高它們作為試劑或藥物的效用。

PHMB(聚六亞甲基雙胍)是已知的作為安全有效的殺生物劑(biocidal agent)，并被用作消毒劑(sanitiser)和防腐劑：US7897553、US 4758595、 US2008261841；US20040009144。本申請的發明者已經出人意料地發現 PHMB和相關的分子是有用的促入劑。出人意料地觀察到PHMB(舉例) 本身進入多種細胞，包括細菌、真菌和哺乳動物細胞。更出人意料地是， PHMB(舉例)能夠與多種分子形成納米顆粒并將這些分子遞送至這些細胞內。最后發現所遞送的從核酸至小分子的分子在細胞內是能發揮作用的。

在本說明書中明顯的先前出版的文獻的列出或論述不一定被認為是承認該文獻是現有技術狀態的部分或是公知常識。