[發明專利]一種放射性細胞損傷模型的構建方法

在審

• 申請號: 202010322000.9
• 申請日: 2020-04-22
• 公開（公告）號: CN111424029A
• 公開（公告）日: 2020-07-17
• 發明（設計）人: 趙路;田磊;賈駿麒;宗春琳;張哲儒;靳丹;郭凱;景莉
• 申請（專利權）人: 中國人民解放軍空軍軍醫大學
• 主分類號: C12N13/00
• 分類號: C12N13/00;C12N5/0775
• 代理公司: 西安鼎邁知識產權代理事務所(普通合伙) 61263
• 代理人: 李振瑞

1.一種放射性細胞損傷模型的構建方法，其特征在于，應用γ射線對骨髓間充質干細胞進行梯度劑量照射；照射后檢測γ射線對骨髓間充質干細胞的損傷情況；根據骨髓間充質干細胞增殖能力、凋亡程度的改變，選定γ射線照射劑量，并以選定的γ射線照射劑量照射的骨髓間充質干細胞作為所述放射性細胞損傷模型。

2.根據權利要求1所述的放射性細胞損傷模型的構建方法，其特征在于，所述γ射線選用基于鈷60放射源的γ射線，對骨髓間充質干細胞的照射劑量設置為2～8Gy。

3.根據權利要求1所述的放射性細胞損傷模型的構建方法，其特征在于，所述骨髓間充質干細胞取自幼年SD大鼠，應用γ射線對第3代骨髓間充質干細胞進行照射。

4.根據權利要求3所述的放射性細胞損傷模型的構建方法，其特征在于，所述骨髓間充質干細胞的提取方法為：在無菌條件下，取出幼年SD大鼠的股骨和脛骨中的骨髓；制備成骨髓細胞懸液，離心，棄去上清液；接種，培養，選用傳至第3代的骨髓間充質干細胞。

5.根據權利要求1所述的放射性細胞損傷模型的構建方法，其特征在于，所述γ射線照射骨髓間充質干細胞的劑量率控制在2.538Gy/min，對升降源過程中的邊界效應進行積分計算，使骨髓間充質干細胞實際所受的累積照射劑量達到2～8Gy。

6.根據權利要求1所述的放射性細胞損傷模型的構建方法，其特征在于，利用鈷60放射源的γ射線照射幼年SD大鼠的骨髓間充質干細胞，作為所述放射性細胞損傷模型的條件選擇為：4Gy劑量、2.538Gy/min劑量率。

7.根據權利要求1所述的放射性細胞損傷模型的構建方法，其特征在于，包括，

從幼年SD大鼠的股骨和脛骨的骨髓中提取骨髓間充質干細胞，培養傳至第3代；

對第3代骨髓間充質干細胞進行鑒定；

利用鈷60放射源的γ射線照射經鑒定確認后的骨髓間充質干細胞，照射劑量梯度設置為2Gy、4Gy、6Gy、8Gy，γ射線劑量率控制在2.538Gy/min，對升降源過程中的邊界效應進行積分計算，使骨髓間充質干細胞實際所受的累積照射劑量達到2Gy、4Gy、6Gy、8Gy；

根據骨髓間充質干細胞增殖能力、凋亡程度，結合活細胞篩選檢測，選定特定γ射線照射劑量照射的骨髓間充質干細胞作為所述放射性細胞損傷模型。

8.根據權利要求7所述的放射性細胞損傷模型的構建方法，其特征在于，所述γ射線4Gy劑量照射后的骨髓間充質干細胞內的α-SMA表達量增加。

9.根據權利要求7所述的放射性細胞損傷模型的構建方法，其特征在于，對第3代骨髓間充質干細胞進行流式細胞鑒定，CD45為陰性表達，CD44和CD90為陽性表達。