[發明專利]制備檢測THBS2/CA19-9雙指標免疫層析試劑盒

在審

• 申請號: 202010319757.2
• 申請日: 2020-04-21
• 公開（公告）號: CN113533713A
• 公開（公告）日: 2021-10-22
• 發明（設計）人: 楊琦
• 申請（專利權）人: 武漢市朗典精醫生物科技有限公司
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/543;G01N33/558;G01N33/574;G01N33/577
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本發明具體涉及一種同時檢測血小板反應素2(Thrombospondin?2，THBS2)和癌癥抗原19?9(CA19?9)免疫層析試劑盒，主要成分為免疫層析試紙條，由PVC底板上依次粘貼樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸水紙組成。其中結合墊吸附有THBS2抗體?微球和CA19?9抗體?微球，硝酸纖維素膜固定THBS2抗體形成檢測線1(T1線)，固定CA19?9抗體形成檢測線2(T2線)，固定抗IgG抗體形成質控線(C線)。本發明同時公開了THBS2抗體和CA19?9抗體偶聯微球過程。本發明建立THBS2/CA19?9免疫層析試劑盒，同時檢測血液中THBS2和CA19?9濃度，用于篩查早期胰腺癌及監測胰腺癌的預后和復發。

技術領域

本發明屬于免疫學領域，具體涉及制備出THBS2抗體-熒光微球和CA19-9抗體-熒光微球，建立檢測 THBS2/CA19-9免疫層析試劑盒過程。

背景技術

癌癥抗原19-9(CA19-9)是一種胰腺癌、膽囊癌、結腸癌和胃癌等相關腫瘤標志物，存在于一些癌細胞表面的粘液醣蛋白。CA19-9可從腫瘤細胞表面脫落，在血液和其他體液中可檢測到CA19-9。血液高水平CA19-9通常是胰腺癌的征兆，對胰腺癌有較高的靈敏度和特異性，其陽性率在70％-95％之間，且隨手術后病情好轉而降低。健康人血液中可有低量CA19-9，但有時高水平CA19-9可以存其他類型癌癥，如膽囊癌、膽管癌、結腸直腸癌、胃癌、肺癌、肝癌，或某些非癌性疾病，包括肝硬化或膽結石。

血小板反應素2(Thrombospondin-2，THBS2)是分泌型150KDa鈣結合蛋白，屬于人血小板反應蛋白家族成員之一，THBS2是一種二硫鏈連接的三聚糖蛋白，能介導細胞與細胞，細胞與基質間的相互作用。多種組織中表達THBS2，能促進細胞增殖、聚集、運動、血管生成，并與腫瘤的發生和發展密切相關。

有研究檢測胰腺導管腺癌(Pancreatic ductal adenocarcinoma，PDAC)患者血液中THBS2和CA19-9水平，設定THBS2臨界值為42ng/ml和CA19-9臨界值為55U/ml，診斷PDAC靈敏度為93％，而特異性為92％；診斷結腸及直腸癌的敏感度為65％，而特異性為87％，檢測血液中THBS2和CA19-9水平可用作PDAC及腸癌診斷指標。

研究表明THBS2表達水平與晚期非小細胞肺癌病人生存時間相關，THBS2水平越高，生存時間越短，大于25ng/ml的病人平均生存時間不9個月。THBS2通過降低miR-376c表達而上調基質金屬蛋白酶-2(MMP-2) 表達，促進前列腺癌轉移。另外，在卵巢癌和急性淋巴白血病中THBS2基因發生甲基化而沉默。盡而，檢測血液中THBS2有助于早期診斷多種癌癥發生，特別PDAC，需要開發簡單，快速，定量檢測血液中THBS2 和CA19-9濃度的試劑盒。

本發明建立THBS2/CA19-9免疫層析試劑盒，同時檢測血液中THBS2和CA19-9濃度，用于篩查早期胰腺癌，監測胰腺癌預后和復發。

發明內容

本發明公開了一種THBS2/CA19-9免疫層析試劑盒，含免疫層析試紙條，層析液和THBS2/CA19-9校準品。免疫層析試紙條由PVC底板上順序連接固定樣品墊、結合墊、硝酸纖維素膜和吸水紙組成，看圖1免疫層析試紙條示意圖。結合墊上吸附THBS2抗體-微球和CA19-9抗體-微球；硝酸纖維素膜上固定THBS2抗體形成檢測線1(T1線)，固定CA19-9抗體形成檢測線2(T2線)和固定抗IgG抗體形成質控線(C線)。

所述的微球可以是熒光微球，彩色微球，金標微球，磁性微球及上轉換發光微球的一種，本發明選用銪螯合物(Europium Chelate)熒光微球，激發光波長360-420nm，發射光波長600-650nm。

所述熒光微球，表面修飾官能團為氨基、羧基、羥基或環氧基的一種，優選為羧基修飾過熒光微球。選用熒光微球直徑范圍是100-300nm，優選為直徑100nm和200nm熒光微球。