[發明專利]靶向AQP4基因的RNA干擾表達載體構建及應用

在審

• 申請號: 202010319214.0
• 申請日: 2020-04-21
• 公開（公告）號: CN111676249A
• 公開（公告）日: 2020-09-18
• 發明（設計）人: 陳建強;關瑩;戰躍福;吳曄華
• 申請（專利權）人: ?？谑腥嗣襻t院(中南大學湘雅醫學院附屬?？卺t院)
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N15/85;C12N15/66;A61K31/7105;A61K48/00;A61P25/00;A61P29/00;A61P25/28
• 代理公司: 北京化育知識產權代理有限公司 11833
• 代理人: 尹均利

1.一種靶向大鼠AQP4基因的RNA干擾表達載體，其特征在于：所述RNA干擾表達載體的序列包括根據大鼠AQP4基因序列設計的能夠產生干擾AQP4蛋白表達的siRNA的DNA片段。

2.權利要求1所述的靶向大鼠AQP4基因的RNA干擾表達載體的構建方法，其特征在于：包括以下步驟：

①小分子干擾AQP4-siRNA序列設計

通過Gene Bank獲取大鼠的AQP4mRNA序列，Gene ID：612628，按照基因設計原則設計備選的AQP4-siRNA，通過預實驗選出最佳序列。根據每條AQP4-siRNA序列設計2條互補的DNA模板單鏈，包括正義鏈和反義鏈，中間以10個脫氧核苷酸所形成的環結構相連，后面接有RNA polyⅢ聚合酶轉錄中止位點，同時模板兩端分別設計BamH Ⅰ和Xho Ⅰ酶切點，并以綠熒光蛋白(GFP)為陽性對照，以Scramble Ⅱ為陰性對照；

②構建表達AQP4-siRNA的質粒載體

合成2條單鏈DNA模板，取等量的DNA模板合成片斷經退火生成雙鏈DNA，4％瓊脂糖核酸電泳，純化電泳產物，將獲得的雙鏈DNA與載體片斷連接，合成含AQP4-siRNA的質粒載體，并對比不同載體轉染效果。

3.根據權利要求2所述的靶向大鼠AQP4基因的RNA干擾表達載體的構建方法，其特征在于：步驟②中所述的雙鏈DNA連接的載體是慢病毒、脂質體或逆轉錄病毒中的一種。

4.權利要求1所述的靶向大鼠AQP4基因的RNA干擾表達載體應用于制備治療大鼠腦損傷的制劑。

5.權利要求1所述的靶向大鼠AQP4基因的RNA干擾表達載體應用于研究AQP4在機體疾病發生中的作用。