[發(fā)明專利]牛細粒棘球蚴病的特異性檢測抗原及其應用

有效

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• 申請日: 2020-04-21
• 公開（公告）號: CN111574608B
• 公開（公告）日: 2021-11-19
• 發(fā)明（設計）人: 楊娜;陳啟軍;姜寧;丁瑩瑩;桑曉宇;馮穎;陳冉;王新一
• 申請（專利權）人: 沈陽農(nóng)業(yè)大學
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C12N15/12;G01N33/68;G01N33/558
• 代理公司: 北京知呱呱知識產(chǎn)權代理有限公司 11577
• 代理人: 杜立軍

本發(fā)明公開了一種牛細粒棘球蚴病的特異性檢測抗原及其應用。所述牛細粒棘球蚴病的特異性檢測抗原蛋白質，是如下(a1)或(a2)：(a1)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的蛋白質；(a2)將(a1)限定的蛋白質的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加，且功能相同的蛋白質。本發(fā)明時間分辨熒光微球作為示蹤物，制備免疫層析試紙條在臨床上操作簡單、診斷快速、靈敏度高、特異性強。

技術領域

本發(fā)明涉及醫(yī)療器械技術領域，具體涉及一種牛細粒棘球蚴病的特異性檢測抗原及其應用。

背景技術

細粒棘球蚴病為一種嚴重的全球性的人畜共患病，人或反芻動物主要通過誤食了細粒棘球絳蟲排出的蟲卵而發(fā)病，被稱為“蟲癌”。目前，關于細粒棘球蚴病診斷技術的研究投入較少，最常用的診斷方法就是解剖查看蟲體，隨著分子技術和免疫技術的發(fā)展，現(xiàn)在有分子診斷，比如LAMP，免疫學診斷，如ELISA試劑盒法、膠體金等，但從臨床應用發(fā)現(xiàn)，這些方法檢測的準確性不高、方便性不強，無法便于基層工作者操作檢測。動物感染細粒棘球蚴時，傳統(tǒng)的診斷方法為屠宰時診斷，然而，在屠宰過程中，典型的囊狀組織也許是炎性導致的肉芽腫，導致診斷錯誤；血清學診斷包括膠體金免疫層析法、酶聯(lián)免疫吸附試驗。這些方法通常使用的是天然棘球囊液，但使用天然棘球囊液的缺點是易于其他患病動物的血清發(fā)生交叉反應，制備昂貴且難以進行商品化。雖然，細粒棘球蚴病在人類診斷方面已有很多研究，但在診斷動物方面的研究甚少，且動物在自然感染該病時，抗體反應不明顯，易導致診斷錯誤。因此提高細粒棘球蚴的免疫診斷，尋找一種可靠的抗原，建立一種高效、準確、特異性好而又簡便的診斷技術至關重要。

因此，基于細粒棘球蚴轉錄組的數(shù)據(jù)，篩選出Hyppthetical EGR_01530。Hypothetical protein EGR_01530含有一個半胱氨酸的保守結構域，研究報道表明在線蟲體內(nèi)的半胱氨酸蛋白可以調(diào)節(jié)其自身的蛋白酶活性、宿主的蛋白酶活性和調(diào)控宿主的免疫反應。并且據(jù)Josiah Ochieng等人報道稱相關的半胱氨酸超家族可以確保寄生蟲在宿主體內(nèi)生存。

此外，最近，基于表位的抗原已經(jīng)成為實現(xiàn)高敏感性和特異性捕獲機體所產(chǎn)生的抗體，具有成功替代重組抗原的潛力。利用基于表位抗原的診斷方法已經(jīng)成功應用于各種疾病，例如、利什曼病、錐體蟲病、鉤端螺旋體病和弓形蟲病。并且，隨著生物信息學的發(fā)展，為此類抗原的設計提供了新的策略。這些技術使重組蛋白的設計和后期的合成成為可能，且這些重組蛋白具有新的抗原性特征，因此，本發(fā)明也選取了基于表位的抗原。作為牛細粒棘球蚴層析試紙條的研制。

發(fā)明內(nèi)容

為此，本發(fā)明提供一種牛細粒棘球蚴病的特異性檢測抗原及其應用。

本發(fā)明所提供的牛細粒棘球蚴病的特異性檢測抗原，是如下(a1)或(a2)：

(a1)氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示的蛋白質；

(a2)將(a1)限定的蛋白質的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加，且功能相同的蛋白質。

編碼所述抗原蛋白質的核酸分子也是本發(fā)明的保護范圍。

優(yōu)選地，所述核酸分子是編碼權利要求1所述的蛋白質的基因，所述基因是如下任一所述的DNA分子：

(b1)編碼序列如SEQ ID NO.2所示的DNA分子；

(b2)在嚴格條件下與(b1)限定的DNA分子雜交且編碼權利要求1所述的蛋白質的DNA分子；

(b3)與(b1)或(b2)限定的DNA分子具有90％以上同源性且編碼權利要求1所述的蛋白的DNA分子。

本發(fā)明還提供所述蛋白質配對用于牛細粒棘球蚴病的抗原蛋白質，是如下(c1)或(c2)：

(c1)氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示的蛋白質；