[發明專利]一種犬細小病毒膠體金快速檢測試劑盒的制作方法

在審

• 申請號: 202010317042.3
• 申請日: 2020-04-21
• 公開（公告）號: CN111474349A
• 公開（公告）日: 2020-07-31
• 發明（設計）人: 鄧海崗
• 申請（專利權）人: 廣州福懋畜牧獸醫服務有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/543;G01N33/577
• 代理公司: 廣州市華學知識產權代理有限公司 44245
• 代理人: 張澤鋒

1.一種犬細小病毒膠體金快速檢測試劑盒的制作方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟100：制備20nm膠體金溶液；

步驟200：膠體金標記；

步驟300：對膜材進行處理；

步驟400：對T，C線進行包被；

步驟500：將成品進行包裝。

2.根據權利要求1所述的犬細小病毒膠體金快速檢測試劑盒的制作方法，其特征在于，步驟100包括如下步驟：

步驟101：取潔凈的250ml三角燒瓶1個，加入100ml濃度為0.01％的氯金酸雙蒸水溶液,加熱煮沸，迅速加入1％檸檬酸三鈉溶液繼續煮沸8分鐘，自然冷卻至室溫，蒸發的水量用雙蒸水不足；

步驟102：透射電鏡鑒定膠體金顆粒呈圓形大小均一無聚集為合格，置棕色玻璃瓶密閉避光保存。

3.根據權利要求1所述的犬細小病毒膠體金快速檢測試劑盒的制作方法，其特征在于，步驟200包括如下步驟：

步驟201：CPV單抗3G8透析除鹽；

步驟202：在100ml膠體金溶液中加入0.2M碳酸鉀溶液調PH至7.40，攪拌均勻，邊加邊攪拌，逐滴加入除鹽后的CPV單抗3G8 1.4mg，加完繼續攪拌5分鐘后靜置15分鐘；

步驟203：再加入10％的BSA10ml，攪拌10分鐘后靜置15分鐘，4攝氏度12000轉離心45分鐘，棄上清；

步驟204：加入0.01mmol/L含1％BSA的PB液，攪拌均勻，4攝氏度過夜；

步驟205：在4攝氏度10000轉離心45分鐘，棄上清，用重懸液重懸至原體積1/10。

4.根據權利要求1所述的犬細小病毒膠體金快速檢測試劑盒的制作方法，其特征在于，步驟300包括如下步驟：

步驟301：樣品墊的處理：玻纖樣品墊用含1％S17的PH7.0的PBS處理15分鐘，65攝氏度干燥箱烘干10小時；

步驟302：金墊的處理：用金墊處理液浸聚酯纖維膜15分鐘，45攝氏度干燥箱4小時烘干；

步驟303：以5ul/cm，10cm/s將重懸后的金標單抗噴于處理后的金墊，45攝氏度烘干2小時。

5.根據權利要求1所述的犬細小病毒膠體金快速檢測試劑盒的制作方法，其特征在于，步驟400包括如下步驟：

步驟401：CPV單抗9E7和羊抗鼠用含2％蔗糖PH7.2，10mmol/L的PBS分別稀釋至1mg/ml和1.5mg/ml濃度；

步驟402：將135s的NC膜貼于PVC板上，用劃膜儀將CPV單抗9E7和羊抗鼠以1ul/cm和10cm/s包被。

6.根據權利要求1所述的犬細小病毒膠體金快速檢測試劑盒的制作方法，其特征在于，步驟500包括如下步驟：

步驟501：將吸水紙壓住NC膜1mm貼在PVC板上；

步驟502：將制作好的金標墊壓在NC膜上1mm貼在PVC板上；

步驟503：將處理后的樣品墊壓在金標墊上1mm貼在PVC板上；

步驟504：用切條機將制作好的大板切成4mm寬的試紙條,將試紙條裝入卡殼,與干燥劑裝入鋁箔袋密封；

步驟505：配制樣品稀釋液分裝于稀釋液管內，每管稀釋液與試劑盒一起組成一份檢測試劑；

步驟506：做特異性與靈敏度測試準予合格。