[發(fā)明專利]一種降低芍藥組織培養(yǎng)中外植體污染的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010314221.1
• 申請日: 2020-04-20
• 公開（公告）號: CN111602594A
• 公開（公告）日: 2020-09-01
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張利;敖青霞;姜媛媛;趙茂俊;倪蘇;王龍;胡佳;馮均;周勁;余燕;王海平;吳金勇;陳歡
• 申請（專利權(quán)）人: 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 成都東恒知盛知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 51304
• 代理人: 何健雄;廖祥文

一種降低芍藥組織培養(yǎng)中外植體污染的方法，采集芍藥幼嫩部位進(jìn)行低溫處理；低溫處理后的芍藥外植體使用洗潔精浸泡后流水沖洗；沖洗完畢后的芍藥外植體，浸泡在多菌靈和青霉素鈉混合溶液中并置于搖床；浸泡后的芍藥外植體由75％酒精消毒，再以0.1％升汞消毒進(jìn)行表面消毒；消毒后的芍藥外植體在含有益培靈的培養(yǎng)基中培養(yǎng)；本發(fā)明能有效降低芍藥組織培養(yǎng)中的污染，且芍藥外植體存活率較高，實用性、推廣性強。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及到組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，具體為一種降低芍藥組織培養(yǎng)中外植體污染的方法。

背景技術(shù)

芍藥(Paeonia lactiflor Pall.)為芍藥科芍藥屬，多年生草本植物，是我國著名的觀賞、藥用植物。但芍藥的傳統(tǒng)繁殖方式生產(chǎn)周期長繁殖系數(shù)低，嚴(yán)重影響了芍藥的規(guī)?；a(chǎn)。組織培養(yǎng)技術(shù)是目前植物快繁的有效方法之一，具有繁殖周期短，繁殖系數(shù)高等優(yōu)勢。但芍藥自身攜帶內(nèi)生菌，用常規(guī)的消毒方法難以控制其內(nèi)生菌污染，培養(yǎng)初期出現(xiàn)大量細(xì)菌和真菌污染，嚴(yán)重制約了芍藥組織培養(yǎng)的發(fā)展。因此，研究一種降低芍藥組織培養(yǎng)中外植體污染的方法成為目前迫切需要解決的技術(shù)難題。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述現(xiàn)有技術(shù)存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種降低芍藥組織培養(yǎng)中外植體污染的方法。

為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供了一種降低芍藥組織培養(yǎng)中外植體污染的方法，包括以下步驟：

(1)采集芍藥幼嫩部位進(jìn)行低溫處理；

(2)低溫處理后的芍藥外植體使用洗潔精浸泡后流水沖洗；

(3)沖洗完畢后的芍藥外植體，浸泡在多菌靈和青霉素鈉混合溶液中并置于搖床；

(4)浸泡后的芍藥外植體由75％酒精消毒，再以0.1％升汞消毒進(jìn)行表面消毒；

(5)消毒后的芍藥外植體在含有益培靈的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。

優(yōu)選的，所述步驟1低溫處理為將新采集的芍藥外植體用錫箔紙包裹置于4℃冰箱中，低溫處理24-48h。

優(yōu)選的，所述步驟2芍藥外植體由稀釋洗潔精浸泡20min，清洗外表的泥沙后流水沖洗芍藥外植體1h。

優(yōu)選的，所述步驟3將芍藥外植體浸泡在濃度為3-5g/L的多菌靈和濃度為0.5-1.5g/L青霉素鈉混合溶液的培養(yǎng)瓶中，置于搖床，振蕩速度為160 1/min，振蕩時間為1h，然后用無菌蒸餾水清洗三次。將培養(yǎng)瓶外部噴灑75％酒精，放入超凈工作臺中，大風(fēng)吹20min。

優(yōu)選的，所述步驟4在超凈工作臺上，用75％酒精消毒10s，無菌蒸餾水清洗3次，0.1％升汞消毒7-8min，無菌蒸餾水清洗8-10次。

優(yōu)選的，所述步驟5將芍藥外植體切為適宜大小，接入到含有益培靈的培養(yǎng)基中，22-25℃下黑暗培養(yǎng)一周。

優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基為：MS+蔗糖30g/L+TDZ 2.5mg/L+瓊脂粉7.5g/L+益培靈0.1-0.2g/L，培養(yǎng)基pH值調(diào)至5.8-6.0，將配制好的培養(yǎng)基裝入培養(yǎng)瓶中，121℃高溫滅菌25min。

相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的有益效果為：

1、本發(fā)明從加強芍藥外植體的表面消毒和培養(yǎng)過程中抑制內(nèi)生菌污染兩個方面入手，有效降低芍藥組織培養(yǎng)過程中的外植體的污染；

2、在前期經(jīng)多菌靈處理后的芍藥外植體培養(yǎng)過程中幾乎不出現(xiàn)真菌污染；青霉素鈉處理后，能夠抑制一部分芍藥內(nèi)生菌；

3、多菌靈和青霉素鈉混合溶液處理時置于搖床，可以加強混合溶液的殺菌效果；

4、在組織培養(yǎng)過程中內(nèi)生菌是持續(xù)出現(xiàn)的，培養(yǎng)基中添加益培靈能夠有效地減少芍藥組織培養(yǎng)過程中的內(nèi)生菌污染；且經(jīng)過這一系列的消毒處理后，外植體存活率較高。