[發明專利]慢病毒的滴度提高型轉移質粒

有效

• 申請號: 202010313764.1
• 申請日: 2020-04-20
• 公開（公告）號: CN111411110B
• 公開（公告）日: 2022-04-29
• 發明（設計）人: 楊小丹;陳世優;朱秀琴;陳超;陳小鋒;李文佳
• 申請（專利權）人: 東莞市東陽光生物藥研發有限公司;廣東東陽光藥業有限公司
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/867;C12N7/00
• 代理公司: 北京清亦華知識產權代理事務所(普通合伙) 11201
• 代理人: 肖陽

本發明提出了一種分離的核酸。該核酸具有X₁X₂TAX₅X₆X₇TX₉所示的核苷酸序列，其中，X₁為A或G；X₂為T或C；X₅為A或G；X₆為C或T；X₇為T或缺失；X₉為T或G；但不具有GTTAACTTT所示的核苷酸序列。根據本發明實施例的分離的核酸位于慢病毒包裝轉移質粒的cPPT/CTS元件的5’端及5’上游，具有上述分離的核酸的轉移質粒進入細胞核效率大幅提高，所包裝出的病毒的滴度大幅提高。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體地，本發明涉及分離的核酸、轉移質粒、病毒包裝試劑盒以及包裝病毒的方法。

背景技術

目前，慢病毒作為一種基因遞送載體，被廣泛的應用于對各種疾病進行基因治療，如CAR-T制備、造血干細胞基因轉導。

慢病毒的生產工藝流程一般包括：①質粒(包括1個轉移質粒和輔助質粒)提取和純化→②質粒共轉染293T或293F細胞→③收集病毒上清→④純化、濃縮、無菌→⑤得到可供基因治療使用的慢病毒。

現有的技術中，步驟③中得到的慢病毒生產初始滴度低、經步驟⑤得到的可供使用的慢病毒收率也極低(僅20％左右)；而步驟②中是采用瞬時轉染的方式，生產成本高，且體系擴大難度極大。這些都導致單批次慢病毒產量十分有限，無法滿足高病毒載體用量適應癥的治療需求。

因此，迫切需要開發出新的提高慢病毒產量的技術。

發明內容

本發明旨在至少在一定程度上解決相關技術中的技術問題之一。

為此，在本發明的第一方面，本發明提出了一種分離的核酸。根據本發明的實施例，所述核酸具有X₁X₂TAX₅X₆X₇TX₉所示的核苷酸序列，其中，X₁為A或G；X₂為T或C；X₅為A或G；X₆為C或T；X₇為T或缺失；X₉為T或G；但不具有GTTAACTTT所示的核苷酸序列。根據本發明實施例的分離的核酸位于慢病毒包裝轉移質粒的cPPT/CTS元件的5’端及5’上游，具有上述分離的核酸的轉移質粒進入細胞核效率大幅提高，所包裝出的病毒的滴度大幅提高。

根據本發明的實施例，上述核酸還可以進一步包括如下附加技術特征至少之一：

根據本發明的實施例，具有ACTAGTTG所示的核苷酸序列。具有ACTAGTTG所示的核苷酸序列的核酸的轉移質粒所包裝出的病毒滴度提高顯著。

在本發明的第二方面，本發明提出了一種轉移質粒。根據本發明的實施例，所述轉移質粒攜帶前面所述的核酸。根據本發明實施例的轉移質粒所包裝出的病毒的滴度得到顯著提高，相比于現有技術，病毒滴度至少可提高1.3倍。

根據本發明的實施例，上述轉移質粒還可以包括如下附加技術特征至少之一：

根據本發明的實施例，位于所述轉移質粒中cPPT/CTS元件的5’端及5’端上游。

根據本發明的實施例，所述核酸位于所述轉移質粒中cPPT/CTS元件的5’端2～5bp及5’端上游4～8bp范圍內，優選地，所述核酸位于所述轉移質粒中cPPT/CTS元件的5’端3bp及5’端上游6bp范圍內。

根據本發明的實施例，所述轉移質粒具有SEQ ID NO:1所示的核苷酸序列。