[發明專利]雙拷貝gC基因的重組偽狂犬病毒TK/gI/gE缺失株及其構建和應用

在審

• 申請號: 202010312089.0
• 申請日: 2020-04-20
• 公開（公告）號: CN111690619A
• 公開（公告）日: 2020-09-22
• 發明（設計）人: 琚春梅;陳美靜;何淑菲;顏志斌;吳曉燕;紀秋云
• 申請（專利權）人: 華南農業大學
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N15/85;C12N15/65;A61K39/245;A61P31/22;C12R1/93
• 代理公司: 廣州粵高專利商標代理有限公司 44102
• 代理人: 趙崇楊

本發明公開了一種雙拷貝gC基因的重組偽狂犬病毒TK/gI/gE缺失株，是在偽狂犬重組病毒PRV?AH?gE^?/gI^?缺失株上再缺失部分TK基因，同時在gE/gI基因缺失位置處插入gC基因后得到；所述缺失的部分TK基因序列如SEQ ID NO:1所示；所述gC基因序列如SEQ ID NO:2所示。所述雙表達gC蛋白的rPRV?AH?TK^?/gI^?/gE^?/gC⁺疫苗更能引起中和抗體的產生，對免疫小鼠可以提供更好的保護效果。本發明構建的重組病毒可作為新的疫苗候選株為控制當前國內偽狂犬病疫情提供更多選擇，具有較大的應用前景。

技術領域

本發明涉及豬偽狂犬弱毒活疫苗技術領域，更具體地，涉及一株雙拷貝gC 基因的重組偽狂犬病毒TK/gI/gE缺失株及其構建和應用。

背景技術

偽狂犬病是由偽狂犬病病毒(PRV)引起的一種急性傳染病，主要臨床癥狀有發熱、神經系統癥狀、呼吸道癥狀等。PRV除了可以感染豬、牛、綿羊、犬和貓以外，多種野生動物也能感染該病，其中豬是PRV的自然宿主。到目前為止偽狂犬病沒有有效的藥物，疫苗接種依然是預防和控制偽狂犬病的有效手段。國內外已研制的疫苗有滅活疫苗、弱毒疫苗和基因缺失苗。由于早期國內外用的滅活疫苗和弱毒疫苗都會存在一些缺點，加上基因編輯技術的逐漸成熟，所以基因工程疫苗成為了研究的熱點。

1990年之后國內大規模應用PRV基因缺失疫苗，除個別地區偶發外，總體上疫情得到有效控制。但自2011年以來，在河南、河北、江蘇等20多個省出現了新的偽狂犬病疫情。據報道，很多免疫過Bartha-k61株基因缺失疫苗的豬場也出現了疫情，說明了國一直使用的弱毒gE/gI雙缺失的Bartha-k61疫苗已不能給免疫豬提供有效的保護，因此，為了有效控制PRV變異株的流行，亟需開發更為高效的針對PRV變異株的疫苗。

發明內容

本發明的目的在于克服現有技術中存在的上述缺陷和不足，提供一種雙拷貝 gC基因的重組偽狂犬病毒TK/gI/gE缺失株。

本發明的另外一目的在于提供所述雙拷貝gC基因的重組偽狂犬病毒 TK/gI/gE缺失株的構建方法。

本發明的再一目的在于提供所述雙拷貝gC基因的重組偽狂犬病毒TK/gI/gE 缺失株的應用。

本發明的上述目的是通過以下技術方案給予實現的：

一種雙拷貝gC基因的重組偽狂犬病毒TK/gI/gE缺失株，是在偽狂犬重組病毒PRV-AH-gE^-/gI^-缺失株上再缺失部分TK基因，同時在gE/gI基因缺失位置處插入gC基因后得到；所述缺失的部分TK基因序列如SEQ ID NO:1所示；所述 gC基因序列如SEQ ID NO:2所示。

本發明以2013年安徽豬場分離的PRV AH流行毒株為親本豬，在已經獲得的PRV-AH-gE^-/gI^-缺失株的基礎上缺失TK基因約800bp，并在gE/gI基因缺失處插入gC表達盒，獲得PRV-AH-TK^-/gE^-/gI^-/gC⁺毒株。即PRV-AH-TK^-/gE^-/gI^-/gC⁺重組毒株旨在通過雙表達gC來進一步誘導機體體液免疫和細胞免疫，給免疫豬提供更有效的保護。

本發明還提供所述雙拷貝gC基因的重組偽狂犬病毒TK/gI/gE缺失株的構建方法，包括如下步驟：