[發明專利]一種人真皮成纖維細胞體外熱損傷模型構建的方法及其應用

在審

• 申請號: 202010311466.9
• 申請日: 2020-04-20
• 公開（公告）號: CN111518743A
• 公開（公告）日: 2020-08-11
• 發明（設計）人: 柳全文;李婧嫄;辛洪波
• 申請（專利權）人: 南昌大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12Q1/02;A61K35/36;A61P17/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種人真皮成纖維細胞體外熱損傷模型構建的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)將生長狀態良好的高純度真皮成纖維細胞胰酶消化，當顯微鏡下見細胞為單個圓形時終止消化，進行離心并用PBS清洗獲得細胞沉淀；

2)將步驟1)所述的細胞沉淀接種于六孔板，加入真皮成纖維細胞完全培養基進行培養；

3)細胞貼壁之后吸棄培養基，去除未貼壁細胞，添加新鮮真皮成纖維細胞完全培養基，將六孔板于53℃水浴中熱處理50分鐘，得到真皮成纖維細胞熱損傷模型。

2.根據權利要求1所述的一種人真皮成纖維細胞體外熱損傷模型構建的方法，其特征在于，所述真皮成纖維細胞完全培養基具有如下體積份數的各組分：

30-35份的H-DMEM基礎培養基、5-7份的胎牛血清和0.3-0.5份的雙抗溶液；

優選地，所述真皮成纖維細胞完全培養基具有如下體積份數的各組分：

33.6份的H-DMEM基礎培養基、6份15％v/v胎牛血清以及0.4份1％v/v雙抗溶液，所述雙抗溶液含10,000U/ml芐青霉素鈉和10,000μg/ml鏈霉素。

3.根據權利要求1或2所述的一種人真皮成纖維細胞體外熱損傷模型構建的方法，其特征在于，所述培養的條件為，在六孔板中每孔添加2ml真皮成纖維細胞完全培養基，然后置于5％CO₂、95％濕度、37℃培養箱中培養，培養時間為24h。

4.根據權利要求1所述的一種人真皮成纖維細胞體外熱損傷模型構建的方法，其特征在于，步驟1)所述高純度真皮成纖維細胞的純度大于95％；優選地，所述高純度真皮成纖維細胞的純度為100％。

5.根據權利要求1所述的一種人真皮成纖維細胞體外熱損傷模型構建的方法，其特征在于，步驟1)所述終止消化的方法為用含體積濃度5％-15％胎牛血清的DMEM培養基處理細胞，優選地，采用10％胎牛血清的DMEM培養基處理細胞。

6.根據權利要求1所述的一種人真皮成纖維細胞體外熱損傷模型構建的方法，其特征在于，步驟2)所述細胞沉淀在六孔板上的接種細胞密度為1.5×10⁵個/孔。

7.根據權利要求1所述的一種人真皮成纖維細胞體外熱損傷模型構建的方法，其特征在于，步驟1)所述高純度真皮成纖維細胞的制備為以人包皮作為細胞來源，進行分離培養后再進行細胞傳代和純化獲得。