[發明專利]一種檢測新型冠狀病毒的方法和試劑盒

在審

• 申請號: 202010301619.1
• 申請日: 2020-04-16
• 公開（公告）號: CN111363851A
• 公開（公告）日: 2020-07-03
• 發明（設計）人: 李彤;邢曉星;劉琦;王鵬志;馮華華;劉利成;李杰;趙金銀
• 申請（專利權）人: 大連晶泰生物技術有限公司;江蘇宏微特斯醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6851;C12N15/11;C12R1/93
• 代理公司: 大連東方專利代理有限責任公司 21212
• 代理人: 周瑩;李馨

1.一種檢測新型冠狀病毒的引物和探針組合，其特征在于，包括以下引物和探針：

Orf1ab基因上游引物如SEQ ID NO.1所示，

Orf1ab基因下游引物如SEQ ID NO.2所示，

Orf1ab基因探針如SEQ ID NO.3所示；

內參基因β-actin下游引物如SEQ ID NO.4所示，

內參基因β-actin下游引物如SEQ ID NO.5所示，

內參基因β-actin探針如SEQ ID NO.6所示。

2.根據權利要求1所述的一種檢測新型冠狀病毒的引物和探針組合，其特征在于，所述探針均為自身淬滅探針；所述探針的5′端標記熒光報告基團，3′端標記淬滅基團。

3.根據權利要求2所述的一種檢測新型冠狀病毒的引物和探針組合，其特征在于，所述熒光報告基團選自FAM、VIC中的一種；所述淬滅基團選自BHQ1、BHQ2中的一種。

4.一種檢測新型冠狀病毒的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒含有權利要求1或2所述的引物和探針組合。

5.根據權利要求1所述的檢測新型冠狀病毒的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還含有數字PCR反應預混液；逆轉錄酶；DNA模板；無核酸酶水中的一種或多種。

6.根據權利要求5所述的檢測新型冠狀病毒的試劑盒，其特征在于，所述逆轉錄酶為HiScript III Reverse Transcriptase逆轉錄酶。

7.一種檢測新型冠狀病毒的方法，其特征在于，所述方法使用權利要求5所述試劑盒檢測。

8.根據權利要求7所述的一種檢測新型冠狀病毒的方法，其特征在于，所述方法使用數字PCR，所述數字PCR體系中內參基因β-actin上下游引物的工作濃度為450nM，新型冠狀病毒Orf1ab基因的上下游引物的工作濃度為450nM，內參基因β-actin探針ACTB-PROE的工作濃度為225nM，新型冠狀病毒Orf1ab基因的探針1AB-P的工作濃度為450nM；所述PCR體系中逆轉錄酶的量為400U。

9.根據權利要求8所述的一種檢測新型冠狀病毒的方法，其特征在于，所述PCR擴增程序為：1)50℃，50min；

2)96℃，10min；

3)57℃，2min，98℃，30sec，39個循環；

4)57℃，2min；

5)10℃保存。