[發明專利]一種高尿酸血癥大鼠模型及其構建方法

在審

• 申請號: 202010301568.2
• 申請日: 2020-04-16
• 公開（公告）號: CN111418553A
• 公開（公告）日: 2020-07-17
• 發明（設計）人: 段為鋼
• 申請（專利權）人: 段為鋼
• 主分類號: A01K67/027
• 分類號: A01K67/027
• 代理公司: 北京慕達星云知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11465
• 代理人: 王敏

本發明公開了一種高尿酸血癥大鼠模型及其構建方法，屬于基因工程技術領域。本發明公開的高尿酸血癥大鼠模型，先采用CRISPR/Cas9技術敲除SD大鼠的尿酸酶基因獲得雜合子，然后通過血清尿酸表型篩選、肝勻漿酶活性、肝RNART?PCR和肝勻漿蛋白WesternBlot技術證明無尿酸酶表達，繼而獲得尿酸酶缺失大鼠(Uox?/?大鼠)；接下來通過反復選種雜交，將大鼠繁育7代后，雄性和雌性大鼠血清尿酸水平均達到診斷水平。該模型1年存活期達95％，具有可繁殖性。該高尿酸血癥大鼠模型特別適合用來研究高尿酸血癥的機制，篩選降尿酸藥物，并可進一步用于痛風的研究，具有良好應用前景。

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，更具體的說是涉及一種高尿酸血癥大鼠模型及其構建方法。

背景技術

痛風(gout)已是現代社會的常見病和多發病，男性多發，主要發病機制與長期嘌呤代謝障礙、血清尿酸增高有關。一般認為高尿酸血癥(hyperuricemia，男性高于70μg/ml，即420μM)是痛風的基礎。此病由來已久，最早以歐洲和北美較為多見。我國在20世紀80年代后的患病情況有明顯的上升趨勢，且男性高于女性，如2006年山東沿海地區流行病學調查顯示高尿酸血癥的男性患病率為18.3％，痛風為1.94％。目前未見大規模流行病學調查，但有報道稱某些地方(如云南布朗山地區)的痛風發病率可高達10％以上。

最近的臨床研究也表明，高尿酸血癥與多種疾病包括高血壓、糖尿病和高血脂等關聯，也被認為是這些疾病的高危因素，甚至高尿酸血癥已經成為例行健康體檢必查的“第4高”(其他3高為：高血壓、高血糖、高血脂)。

尿酸難溶于水，可被尿酸酶(Uox)轉化成水溶性較高的尿囊素。人(靈長目)在進化過程中，丟失了該酶。因此，人類易罹患高尿酸血癥和痛風；而含有尿酸酶的動物幾乎不自發此病。

為了盡可能模擬人類痛風和高尿酸血癥，尿酸酶缺乏是理想模型動物的前提。已知天然缺乏該酶的哺乳動物有大象、海牛，以及非人靈長類猿等。這些動物的飼養管理昂貴，少有實驗用模式動物。大鼠和小鼠是哺乳動物，雜食，基因組與人相似性高，但在尿酸酶缺失小鼠未研制出來之前，痛風和高尿酸血癥的模型制作在動物選擇和造模方法上五花八門，很難全面模擬臨床現象；這也反映了大量相關科研工作者的無奈。較理想高尿酸血癥動物模型應該滿足以下5個條件，即：1)造模的動物最好為哺乳類，與人類接近；2)像大小鼠一樣，食譜與人相似(雜食)，繁殖快、飼養管理簡便(經濟)；3)沒有尿酸酶的干擾，嘌呤代謝途徑與人一致；4)正常飼養條件下，血清尿酸水平達到臨床診斷水平(雄性動物血清尿酸高于70μg/ml)；5)能長期存活，個體差異小，能穩定繁殖。

大鼠和小鼠常用來研究痛風和高尿酸血癥，模型眾多。然而，普通大鼠和小鼠表達尿酸酶，以此動物制備的痛風和高尿酸血癥模型與臨床存在較大差異。

首先，普通大小鼠的血清尿酸值與人存在較大差別：普通大鼠(雄)的血清尿酸水平在20-30μg/ml(120-180μM)，普通雄性小鼠(含昆明種和ICR)的血清尿酸水平也大體相似(約22μg/ml)，均低于人的參考值(25-70μg/ml，男)。但血肌酐和尿素氮的參考值則與人是接近的，說明大小鼠與人存在的血清尿酸水平差異與腎功能無關。