[發(fā)明專利]甲型流感病毒PB1蛋白T細(xì)胞表位多肽片段及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010298864.1
• 申請(qǐng)日: 2020-04-16
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN113527443B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-03-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孟頌東;王子豪;張含;鄭華國(guó);鞠瑩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)科學(xué)院微生物研究所
• 主分類號(hào): C07K14/11
• 分類號(hào): C07K14/11;A61K39/145;A61K39/39;A61P31/16
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11245
• 代理人: 白鳳瑩

本發(fā)明公開(kāi)了甲型流感病毒PB1蛋白T細(xì)胞表位多肽片段及其應(yīng)用。本發(fā)明首先提供了氨基酸序列為SEQ ID No.2或SEQ ID No.10或SEQ ID No.11的甲型流感病毒PB1蛋白T細(xì)胞表位多肽。本發(fā)明進(jìn)一步提供了上述多肽在制備流感疫苗中的應(yīng)用。本發(fā)明篩選并鑒定出甲型流感病毒PB1蛋白T細(xì)胞表位多肽片段，在接種該抗原表位時(shí)，以gp96蛋白作為免疫佐劑，極大激發(fā)病毒特異性T細(xì)胞免疫反應(yīng)，能有效引起針對(duì)不同亞型的流感病毒株的交叉免疫保護(hù)，這為將來(lái)研發(fā)具有交叉保護(hù)功能的新型流感病毒疫苗奠定基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物制藥領(lǐng)域，具體涉及甲型流感病毒PB1蛋白T細(xì)胞表位多肽片段及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

流感病毒傳播迅速、流行廣泛、致病性強(qiáng)，是當(dāng)今世界最為嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問(wèn)題之一。20世紀(jì)30年代人類就開(kāi)始了對(duì)流感病毒的認(rèn)知及疫苗的開(kāi)發(fā)，然而時(shí)至今日流感病毒依然是威脅人類和動(dòng)物健康的重要病原。流感病毒依據(jù)其表面抗原血凝素(hemagglutinin,HA)和神經(jīng)氨酸酶(neuraminidase,NA)不同又可分為若干不同的亞型。迄今為止，共發(fā)現(xiàn)了18種HA亞型(H1至H18)和11種NA亞型(N1至N11)。流感病毒在感染不同宿主過(guò)程中主要發(fā)生兩個(gè)方面的變異：基因組片段的重排(reassortment)和病毒編碼蛋白氨基酸的變異。由于這些變異機(jī)制的存在，使得流感病毒存在著大量的變異毒株，對(duì)流感病毒的預(yù)防和控制造成極大困難。毫無(wú)疑問(wèn)，疫苗免疫依舊是預(yù)防流感的主要方法。但是，目前使用的疫苗只對(duì)特定的與其HA(血凝素)和NA(神經(jīng)氨酸酶)抗原非常類似的病毒株具有保護(hù)效力，對(duì)于其它與其不類似的病毒株則保護(hù)作用不佳。因此，一旦出現(xiàn)流感病毒新亞型或新毒株，現(xiàn)有疫苗就會(huì)失去其保護(hù)效力。很顯然，受限于流感病毒“抗原轉(zhuǎn)變”和“抗原漂移”的特性，采用常規(guī)以各亞型為主開(kāi)發(fā)的流感滅活疫苗和裂解疫苗，已經(jīng)無(wú)法有效預(yù)防和抵御新的流感病毒感染。新亞型的出現(xiàn)和流行的趨勢(shì)，嚴(yán)重時(shí)甚至發(fā)生流感大流行。因此，開(kāi)發(fā)針對(duì)多種亞型流感病毒的具有交叉保護(hù)并且長(zhǎng)期保護(hù)功能的流感疫苗成為研究的新熱點(diǎn)。

現(xiàn)有的流感疫苗免疫主要產(chǎn)生針對(duì)病毒HA的抗體，而HA容易發(fā)生變異，這也是現(xiàn)有流感疫苗不能有效產(chǎn)生交叉保護(hù)的根本原因。流感病毒HA抗體水平被認(rèn)為是產(chǎn)生免疫保護(hù)作用的直接因素，然而對(duì)其免疫保護(hù)效果卻仍然存在爭(zhēng)議，1:40的HAI抗體滴度能夠降低成人50％感染，但是在兒童中，1:110的HAI抗體滴度能夠降低50％感染，而1:40的HAI抗體滴度只能產(chǎn)生20％保護(hù)力。大量研究表明，T細(xì)胞免疫在控制流感病毒感染過(guò)程中發(fā)揮了重要作用，免疫保護(hù)效果與T細(xì)胞免疫水平而非中和抗體水平密切相關(guān)。流感病毒T細(xì)胞免疫主要由其內(nèi)部蛋白產(chǎn)生，如M1，PB1，NP等，這些內(nèi)部蛋白所包含的T細(xì)胞表位在多種A型流感病毒中相對(duì)于表面蛋白HA和NA較為保守。研究表明，機(jī)體由于A型H1N1、H3N2及B型流感病毒等周期性流行，存在大量的流感病毒特異性T細(xì)胞，這些特異性T細(xì)胞能夠廣泛的交叉識(shí)別甚至來(lái)源于H5N1病毒的T細(xì)胞表位。例如，在小鼠感染模型中已經(jīng)證實(shí)，不同亞型流感病毒感染產(chǎn)生的T細(xì)胞免疫反應(yīng)能夠?qū)ζ渌麃喰土鞲胁《井a(chǎn)生交叉保護(hù)作用。用H1N1病毒感染小鼠并用H3N2病毒再次感染，呼吸道組織處的T細(xì)胞免疫反應(yīng)可以對(duì)H7N7病毒的入侵提供有效的交叉保護(hù)作用，這種交叉反應(yīng)在病毒感染后3天內(nèi)即可引發(fā)并產(chǎn)生效應(yīng)。在雪貂流感病毒感染模型中，H3N2(A/Brisbane/010/2007)病毒感染后能夠?qū)5N1(A/Indonesia/5/05)病毒再次感染產(chǎn)生交叉保護(hù)，而這種交叉保護(hù)作用與PBMCs中的流感病毒特異性T細(xì)胞頻率具有顯著的相關(guān)性。在禽類感染模型中的研究，H9N2流感病毒感染3-70天后再次感染高致病性H5N1流感病毒，盡管不存在能夠?qū)5N1病毒產(chǎn)生交叉反應(yīng)的中和抗體的存在，仍然能夠使感染H5N1的雞得以存活下來(lái)。更進(jìn)一步的研究表明，當(dāng)將H9N2病毒感染后雞體內(nèi)產(chǎn)生的CD8+T細(xì)胞注入到未免疫的雞體內(nèi)，能夠有效的保護(hù)其在致死劑量H5N1病毒下的感染，而注入CD4+T細(xì)胞則不能產(chǎn)生有效的保護(hù)作用。在靈長(zhǎng)類動(dòng)物模型中，季節(jié)性H1N1(A/Kawasaki/173/2001)流感病毒感染后，其產(chǎn)生的特異性T細(xì)胞能夠在再次感染2009H1N1(A/California/04/2009)流感病毒2天內(nèi)產(chǎn)生效應(yīng)并清除病毒，而此時(shí)中和抗體尚未得到有效激活。這些動(dòng)物感染模型中的研究充分表明，T細(xì)胞免疫介導(dǎo)的交叉反應(yīng)能夠有效保護(hù)動(dòng)物在再次接觸不同流感病毒的入侵。