[發(fā)明專利]抗MSH6蛋白單克隆抗體、細(xì)胞系及其制備方法和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010289898.4
• 申請(qǐng)日: 2020-04-14
• 公開（公告）號(hào): CN111454365B
• 公開（公告）日: 2021-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊清海;高惠然;陳泳;胡濱陽(yáng);王小亞
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司
• 主分類號(hào): C07K16/40
• 分類號(hào): C07K16/40;C12N15/13;C12N15/70;C12N5/20;G01N33/577;G01N33/574;G01N33/573;C12R1/91
• 代理公司: 福州市景弘專利代理事務(wù)所(普通合伙) 35219
• 代理人: 方圓;林祥翔

本發(fā)明涉及生物檢測(cè)領(lǐng)域，提供了一種抗MSH6蛋白單克隆抗體,其重鏈和輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列分別是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。發(fā)明人還提供了抗MSH6蛋白單克隆抗體的制備方法，其免疫小鼠所用的抗原為SEQ ID NO.1所示核苷酸序列編碼，經(jīng)由大腸桿菌重組表達(dá)的重組蛋白。發(fā)明人還提供了一株分泌抗MSH6蛋白的雜交瘤細(xì)胞系，所述細(xì)胞系為小鼠雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)bM58060?20A2?PU，保藏號(hào)為：CGMCC NO.17492。抗MSH6蛋白單克隆抗體,具有高特異性、敏感性，可以特異性識(shí)別表達(dá)MSH6蛋白的細(xì)胞，適用于免疫學(xué)檢測(cè)，特別是免疫組化檢測(cè)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測(cè)領(lǐng)域，特別涉及抗MSH6蛋白單克隆抗體、細(xì)胞系及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)

MSH6全稱為MutS homolog6(E.coli)，是一種錯(cuò)配修復(fù)基因，定位于2號(hào)染色體的P臂16位上。DNA錯(cuò)配修復(fù)對(duì)于超時(shí)遺傳信息完整性的維持是非常必要的。微衛(wèi)星重現(xiàn)性的改變是由于DNA復(fù)制時(shí)鉸鏈不對(duì)位產(chǎn)生滑動(dòng)而導(dǎo)致的結(jié)果，又稱為微衛(wèi)星不穩(wěn)定性。突變型的錯(cuò)配修復(fù)基因常表達(dá)于高頻度微衛(wèi)星不穩(wěn)定(MSI-H)患者中，與常染色體的顯性遺傳性疾病相關(guān)，稱為遺傳性非息肉病性結(jié)直腸癌(HNPCC)，也可見于散發(fā)性(MSI-H)結(jié)直腸癌患者。

錯(cuò)配修復(fù)(MMR)蛋白是一組細(xì)胞核內(nèi)酶，存在于所有的增殖細(xì)胞內(nèi)，參與發(fā)生了DNA復(fù)制過(guò)程堿基錯(cuò)配的修復(fù)。這些蛋白形成復(fù)合物(異二聚體)結(jié)合于非正常的DNA并啟動(dòng)清除過(guò)程。MMR蛋白的喪失導(dǎo)致增殖細(xì)胞中DNA復(fù)制錯(cuò)誤的堆積，特別是位于短重復(fù)核苷酸序列基因組的區(qū)域，這種現(xiàn)象即為所謂的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性(MSI)，因此，細(xì)胞中的MMR蛋白的缺失與微衛(wèi)星高度不穩(wěn)定(MSI-H)密切相關(guān)，與此相反即是微衛(wèi)星低度不穩(wěn)定(MSI-L)和微衛(wèi)星穩(wěn)定(MSS)。

人類已經(jīng)認(rèn)定的錯(cuò)配修復(fù)功能的基因有九個(gè)，其中五種和臨床關(guān)系密切，因?yàn)樵谶z傳性非息肉病性結(jié)直腸癌(HNPCC，又稱Lynch綜合征)中可能發(fā)生突變，其中MSH6發(fā)生頻率9％。MSH2與MSH6形成異二聚體復(fù)合物，當(dāng)MSH2缺乏時(shí)，MSH6蛋白也同樣缺失，可能是由于蛋白的不穩(wěn)定造成的。

目前，其用途主要為：聯(lián)合檢測(cè)MSH2、MSH6、PMS2、MLH1可用于Lynch syndrome(遺傳性非息肉性結(jié)腸癌)的篩查。

發(fā)明內(nèi)容

發(fā)明人提供了一種抗MSH6蛋白單克隆抗體，所述單克隆抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)的氨基酸序列分別是SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。

進(jìn)一步地，所述單克隆抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)氨基酸序列分別是SEQ ID NO.4和SEQ ID NO.5所示的核苷酸序列所編碼。

進(jìn)一步地，所述單克隆抗體特異性識(shí)別MSH6蛋白。

進(jìn)一步地，所述單克隆抗體由保藏號(hào)為CGMCC NO.17492的雜交瘤細(xì)胞系產(chǎn)生。所述細(xì)胞株為小鼠雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)bM58060-20A2-PU，分類命名為：小鼠雜交瘤細(xì)胞系，該細(xì)胞系已于2019年04月3日在中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心保藏，地址為北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院3號(hào)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所。

進(jìn)一步地，所述抗MSH6蛋白為小鼠IgG2b亞型單克隆抗體。

發(fā)明人還提供了一種抗MSH6蛋白單克隆抗體的制備方法，其免疫小鼠所用的抗原為SEQ ID NO.1所示核苷酸序列編碼，經(jīng)由大腸桿菌重組表達(dá)的重組蛋白。

發(fā)明人還提供了一株分泌抗MSH6蛋白的雜交瘤細(xì)胞系，所述細(xì)胞株為小鼠雜交瘤細(xì)胞系A(chǔ)bM58060-20A2-PU，所述細(xì)胞系保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，保藏號(hào)為：CGMCC NO.17492。

發(fā)明人還提供上述任一所述的抗MSH6蛋白單克隆抗體，在MSH6蛋白免疫檢測(cè)中的用途。