[發明專利]在蛋白質純化過程中降低樣品中的一種或多種雜質的水平的方法

在審

• 申請號: 202010257856.2
• 申請日: 2012-08-20
• 公開（公告）號: CN111423488A
• 公開（公告）日: 2020-07-17
• 發明（設計）人: N·比安;C·吉萊斯皮;M·T·斯通;M·科茲洛夫;J·陳;M·瓦克
• 申請（專利權）人: EMD密理博公司
• 主分類號: C07K1/16
• 分類號: C07K1/16;C07K1/18;C07K1/20;C07K1/22
• 代理公司: 永新專利商標代理有限公司 72002
• 代理人: 張曉威

1.降低含有所關注的蛋白質的樣品中的一種或多種雜質水平的方法，所述方法包括以下步驟：

(i)通過沉淀、絮凝、結晶、與可溶性小分子或聚合物配體結合、或與懸浮色譜介質結合來從所述樣品中分離所述所關注的蛋白質，從而得到含有所述所關注的蛋白質的蛋白相；

(ii)通過將所述蛋白相溶解于合適的緩沖液中來復水所述蛋白質；

(iii)使所述復水的蛋白質以流通模式與含碳材料接觸；

(iv)得到所述樣品的第一洗出液；

(v)使所述第一洗出液與陰離子交換色譜介質接觸；以及

(vi)得到所述樣品的第二洗出液，其中相對于不進行步驟(iii)時所述一種或多種雜質的水平，所述第二洗出液含有較低水平的所述一種或多種雜質。

2.權利要求1的方法，其中所述所關注的蛋白質是抗體或其功能片段。

3.權利要求1的方法，其中所述雜質包括宿主細胞蛋白(HCP)和/或DNA。

4.權利要求1的方法，其中兩個或更多個步驟以流通模式進行。

5.權利要求1的方法，其中所述含碳材料包括活性碳。

6.權利要求1的方法，其中所述含碳材料包括活性炭。

7.權利要求1的方法，其中將所述含碳材料填充入柱、筒或囊中。

8.權利要求1的方法，其中將所述含碳材料浸入多孔材料中。

9.權利要求1的方法，其中將所述含碳材料與選自親和介質、陰離子交換色譜(AEX)介質、陽離子交換色譜(CEX)介質、疏水作用色譜(HIC)介質和混合模式介質中的一種或多種介質混合。

10.權利要求1的方法，其中所述樣品包含細胞培養料。

11.用于從含有所關注的蛋白質和雜質的蛋白A洗出液中純化所關注的蛋白質的純化方法，所述方法包括使所述洗出液與含碳材料和一種或多種選自陰離子交換介質、陽離子交換介質和病毒過濾介質的基質接觸。

12.權利要求11的方法，其中所述所關注的蛋白質是抗體或其功能片段。

13.權利要求11的方法，其中所述蛋白A洗出液中的雜質包括宿主細胞蛋白(HCP)和/或DNA。

14.權利要求11的方法，其中所述雜質是HCP，并且在進行權利要求11的方法后HCP的水平少于所述洗出液中的水平的30％。

15.權利要求11的方法，其中一個或多個步驟以流通模式進行。

16.權利要求11的方法，其中所述含碳材料包括活性碳。

17.權利要求11的方法，其中所述含碳材料包括活性炭。

18.權利要求11的方法，其中將所述含碳材料填充入柱、筒或囊中。

19.權利要求11的方法，其中將所述含碳材料浸入多孔材料中。

20.權利要求11的方法，其中將所述含碳材料與選自親和介質、陰離子交換色譜(AEX)介質、陽離子交換色譜(CEX)介質、疏水作用色譜(HIC)介質和混合模式介質中的一種或多種介質混合。