[發(fā)明專利]一種貝萊斯芽孢桿菌YFI-4及其在制備淡水養(yǎng)殖動物病毒病藥物中的應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 202010250290.0
• 申請日: 2020-04-01
• 公開（公告）號: CN111500488B
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發(fā)明（設計）人: 周勇;薛明洋;范玉頂;孟彥;江南;劉文枝;李逸群;曾令兵
• 申請（專利權）人: 中國水產(chǎn)科學研究院長江水產(chǎn)研究所
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;A61K35/742;A61P31/12;A61P31/22;A61P31/20;A61P31/14;C12R1/07
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所(普通合伙) 42001
• 代理人: 龔瑩瑩

本發(fā)明涉及水產(chǎn)抗病毒微生態(tài)制劑技術領域，具體涉及一種貝萊斯芽孢桿菌YFI?4及其在制備淡水養(yǎng)殖動物病毒病藥物中的應用。本發(fā)明所述貝萊斯芽孢桿菌的保藏編號為CCTCC NO：M2019653。本發(fā)明中的貝萊斯芽孢桿菌YFI?4發(fā)酵上清液，能降低錦鯉皰疹病毒（KHV）、鯉皰疹病毒2型（CyHV?2）和大鯢虹彩病毒（GSIV）等對宿主細胞的感染活性，抑制病毒入侵對細胞的感染，且對細胞無毒副作用，可以用于防治淡水養(yǎng)殖動物病毒性疾病。

技術領域

本發(fā)明涉及水產(chǎn)抗病毒微生態(tài)制劑技術領域，具體涉及一種貝萊斯芽孢桿菌YFI-4及其在抗淡水養(yǎng)殖動物病毒病中的應用。

背景技術

2019年全國漁業(yè)統(tǒng)計年鑒顯示，我國水產(chǎn)養(yǎng)殖總產(chǎn)量為6457萬噸，而淡水魚類養(yǎng)殖產(chǎn)量為3156萬噸，占水產(chǎn)養(yǎng)殖總量的49％。但是，隨著我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，淡水養(yǎng)殖動物病毒病的危害日趨嚴重，每年造成的經(jīng)濟損失達數(shù)百億元，已經(jīng)成為水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)健康可持續(xù)發(fā)展的瓶頸。常見的淡水養(yǎng)殖動物病毒病有：草魚出血病、錦鯉皰疹病毒病、鯽造血器官壞死癥、斑點叉尾鮰呼腸孤病毒病、大鯢虹彩病毒病等。

當前，用于防治淡水養(yǎng)殖動物病毒病的方法主要有藥物防治和疫苗免疫兩種。然而藥物防治引起的副作用、藥物殘留、耐藥性以及水體污染等一系列問題逐漸受到社會各界的普遍重視，除此之外，藥物防治針對病毒性疾病的治療效果不十分明顯；受敏感細胞系缺乏、病毒變異、免疫方式不便的影響，漁用疫苗的發(fā)展受到影響。因此，需要不斷尋求可控制病毒性疾病的有效方法，益生菌因其無毒、無抗藥性、無殘留、抗菌、抗病毒、促生長、綠色安全的優(yōu)點受到廣泛關注。

目前，關于益生菌抗水產(chǎn)病毒也有部分報道，申請人于2019年針對可抵抗水產(chǎn)病毒的益生菌，做了一系列的申請，例如申請?zhí)枮?01910763441.X，報道了一株干酪乳桿菌YFI-5可以抗鯉皰疹病毒II型，申請?zhí)枮?01910765613.7的申請，報道了一株鼠李糖乳桿菌YFI-6可以抗大鯢虹彩病毒。另外，申請?zhí)枮?01880004885.9的申請，報道了一種含有貝萊斯芽孢桿菌的復合微生態(tài)制劑，其可顯著降低蝦的由于副溶血弧菌感染，或者WSSV感染引起的疾病死亡率。但上述病毒存在抗病毒譜窄，適用范圍窄的問題，不利于工業(yè)上的大型推廣。對于貝萊斯芽孢桿菌對于抗水產(chǎn)病毒的報道，尚未檢索到；目前僅申請?zhí)枮?01910297167.1,201811371200.2公開了貝萊斯芽孢桿菌可抗植物病毒。

本發(fā)明首次從養(yǎng)殖水體中篩選出一株抗病毒譜更廣的貝萊斯芽孢桿菌YFI-4，該菌株可以對淡水養(yǎng)殖動物病毒具有抑制作用，對細胞低毒，為淡水養(yǎng)殖動物病毒病的防治提供了新產(chǎn)品。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的在于提供了一種貝萊斯芽孢桿菌YFI-4，所述的菌株的保藏編號為：CCTCC NO：M2019653。

本發(fā)明的另一個目的在于提供了貝萊斯芽孢桿菌YFI-4的應用。

為了達到上述目的，本發(fā)明采取以下技術措施：

本發(fā)明的貝萊斯芽孢桿菌YFI-4是從健康鯽魚腸道中分離得到。具體是解剖健康鯽魚后取出腸道。擠壓腸道，排出其腸道內(nèi)容物后，將腸道剪開，用無菌刀片刮腸道內(nèi)壁，獲得腸道內(nèi)壁樣品。用磷酸鹽緩沖液(Phosphate Buffered Saline，PBS)將腸道內(nèi)壁品連續(xù)10倍倍比稀釋6次，用移液槍分別在各個濃度梯度稀釋液中吸取溶液100μl到BHI固體平板上，用涂布棒涂勻、編號，并做3個重復。將平板倒置后，置于30℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h。挑選不同形態(tài)的菌落接種于普通肉湯平板上分離純化，并且對不同的菌進行抗病毒功能的測定，最終獲得了一株可抗淡水養(yǎng)殖動物病毒的菌株，命名為YFI-4，菌株YFI-4經(jīng)生理生化特征測定和16S rDNA序列同源性分析，鑒定為貝萊斯芽孢桿菌。

該菌株已于2019年8月19日送至中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，分類命名：貝萊斯芽孢桿菌(Bacillus velezensis)YFI-4，保藏編號：CCTCC NO：M2019653，地址：中國武漢武漢大學。