[發(fā)明專利]一種水牛精液的冷凍保存方法有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010247033.1 | 申請日： | 2020-03-31 |
| 公開（公告）號： | CN111345283B | 公開（公告）日： | 2022-02-15 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 孫玲偉;戴建軍;張德福;吳彩鳳;張樹山 | 申請（專利權(quán)）人： | 上海市農(nóng)業(yè)科學(xué)院 |
| 主分類號： | A01N1/02 | 分類號： | A01N1/02 |
| 代理公司： | 南京業(yè)騰知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 32321 | 代理人： | 李靜 |
| 地址： | 201106 *** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 水牛 精液 冷凍 保存 方法 | ||
本發(fā)明涉及一種水牛精液的冷凍保存方法，包括精液的采集、稀釋、冷凍和保存等步驟，首先采用假陰道法采精，選擇色澤為乳白色的精液，過濾去除膠狀物，將品質(zhì)檢查達(dá)標(biāo)的精液預(yù)熱至35℃；將稀釋液預(yù)熱至35℃后對精液進(jìn)行稀釋，將稀釋后的精液降溫至4℃，分裝入0.25mL細(xì)管，封口后進(jìn)行冷凍，冷凍程序為：溫度從4℃開始，4℃維持30min后以1?5℃/min的速率降至?10℃，再從?10℃開始以30?40℃/min的速率降至?140℃，最后?140℃保持10min，完成冷凍，放入液氮中保存。該方法步驟簡單，實用性高，得到的凍精解凍活力高達(dá)67.66％，大大超過了國家級家畜基因庫收藏要求。
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及一種精液保存方法，尤其是一種水牛精液的冷凍保存方法，屬于 家畜繁殖技術(shù)領(lǐng)域。
背景技術(shù)
上海水牛原產(chǎn)于嘉定、寶山、奉賢和崇明等上海郊區(qū)。體型較大，母牛體重 700至900公斤，公牛超過1000公斤。水牛原為我國南方水稻區(qū)的重要役肉兼 用家畜，據(jù)1987年《上海市畜禽品種志》收錄，隨著農(nóng)業(yè)機(jī)械化和農(nóng)村城市化 發(fā)展，水牛役用價值降低，上海水牛的飼養(yǎng)量自1972年以后，每年以0.13頭的 速度在下降，至1982年僅存2.89萬頭，良種水牛數(shù)量更是急劇下降。上海水牛 在2006年全國第二次畜禽遺傳資源調(diào)查時，一度報道已經(jīng)瀕臨滅絕，因此在2012 版的中國畜禽遺傳資源志中未予收錄。
精液的冷凍保存在現(xiàn)代畜牧業(yè)中起著十分重要的作用，使用冷凍精液可以不 受時間、地域和種畜壽命的限制，減少公畜飼養(yǎng)數(shù)量，降低生產(chǎn)成本，提高優(yōu)良 畜種的利用率，在畜種引進(jìn)、血緣更新、疾病控制、瀕危品種以及遺傳多樣性保 護(hù)上都有極其重要的意義。目前中國的牛冷凍精液生產(chǎn)工藝是參照中華人民共和 國牛冷凍精液生產(chǎn)技術(shù)規(guī)程施行，但冷凍精液精子的復(fù)蘇率與原精的質(zhì)量、稀釋 液的種類、精液冷凍溫度及解凍溫度等因素有關(guān)，其中，精液在冷凍過程中的溫 度變化情況是影響精子冷凍質(zhì)量的重要因素之一，現(xiàn)在國內(nèi)牛冷凍精液生產(chǎn)多采 用冷凍儀器設(shè)備廠家提供的冷凍程序，基本上是同一冷凍程序用于各種品種牛的 冷凍精液生產(chǎn)上，因此導(dǎo)致凍精解凍后精子活率比較低。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種水牛精液的冷凍保存方 法。
技術(shù)方案
一種水牛精液的冷凍保存方法，包括如下步驟：
(1)精液的采集
挑選2-6歲成年種公水牛，使用假陰道法采精，采精后選擇色澤為乳白色的 精液，過濾去除膠狀物，然后進(jìn)行品質(zhì)檢查，將品質(zhì)檢查達(dá)標(biāo)的精液預(yù)熱至35℃；
(2)精液的稀釋
將稀釋液預(yù)熱至35℃，然后對步驟(1)中品質(zhì)檢查達(dá)標(biāo)的精液進(jìn)行稀釋， 得到稀釋后的精液；
(3)精液的冷凍和保存
將稀釋后的精液降溫至4℃，4℃下經(jīng)罐裝機(jī)裝入0.25mL細(xì)管，封口完成 后放入程序冷凍儀內(nèi)進(jìn)行冷凍，冷凍程序為：溫度從4℃開始，4℃維持30min 后以1-5℃/min的速率降至-10℃，再從-10℃開始以30-40℃/min的速率降至 -140℃，最后-140℃保持10min，完成冷凍，將冷凍后的精液放入液氮中保存。
進(jìn)一步，步驟(1)中，所述品質(zhì)檢查包括外觀檢查、精子活力檢查和密度 檢查，要求剔除絮狀物較多的精子，精液中精子活率為50％以上。
進(jìn)一步，步驟(2)中，所述稀釋的方法為：第一步：將精液與稀釋液按1:2 的體積比進(jìn)行稀釋混勻，得到混合液；第二步：往第一步的混合液中加入等體積 稀釋液，混勻，即得稀釋后的精液。
進(jìn)一步，步驟(3)中，冷凍程序為：溫度從4℃開始，4℃維持30min后以 1℃/min的速率降至-10℃，再從-10℃開始以35℃/min的速率降至-140℃，最后 -140℃保持10min。
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