[發明專利]檢測新型冠狀病毒的試劑和方法

在審

• 申請號: 202010243709.X
• 申請日: 2020-03-31
• 公開（公告）號: CN113462655A
• 公開（公告）日: 2021-10-01
• 發明（設計）人: 喻長杰;于安路;陳飛;郭子平
• 申請（專利權）人: 中國科學院生物化學與細胞生物學研究所蘇州研究院
• 主分類號: C12N7/00
• 分類號: C12N7/00;C12N15/50;C12N15/70;C12N1/21;C12Q1/70;C12R1/93
• 代理公司: 上海專利商標事務所有限公司 31100
• 代理人: 陶啟長;韋東

本發明公開了一種新型冠狀病毒(SARS?Cov?2)核酸檢測方法的假病毒質控品及其應用，屬于臨床醫學核酸分子檢測技術領域。本發明將SARS?Cov?2特征性基因(ORF1ab、N和E)片段制成多種假病毒，形成陽性假病毒質控品體系。將其他高致病型的人類冠狀病毒(SARS、MERS、HKU1、OC43、NL63、229E)各自特征性基因片段制備成一系列假病毒，形成陰性假病毒質控品體系。在臨床醫學對SARS?Cov?2進行核酸分子檢測時，陽性假病毒質控品、陰性假病毒質控品與待測患者樣本一同參與包括樣本處理在內的整個實驗操作流程，以有效地防止“假陰性”或“假陽性”的實驗結果產生。本發明制備假病毒質控品體系的應用最大限度地降低了SARS?Cov?2核酸分子檢測方法研究開發與驗證過程中因高致病病原微生物所帶來的生物安全性風險。

技術領域

本發明屬于臨床醫學核酸分子檢測技術領域，具體涉及檢測新型冠狀病毒 的試劑和方法。

背景技術

2019新型冠狀病毒(SARS-Cov-2)是一種具有包膜的、不分節段的正鏈 單股RNA病毒，顆粒呈圓形或橢圓形，直徑約60-140nm，屬于網巢病毒目冠 狀病毒科。此病毒每組基因組長度約三萬個核苷酸左右，編碼4個結構蛋白： S蛋白(spike protein)，M蛋白(membraneglycoprotein)，核衣殼蛋白N (nucleocapsid phosphoprotein)，和小包膜E(envelopeprotein)蛋白。其基因 序列顯示SARS-Cov-2屬于乙型冠狀病毒屬譜系β(BetacoronavirusLineage β, Sarbecovirus)進化樹中分支較長的一種病毒，例如MERS-CoV或SARS-CoV。

在《新型冠狀病毒肺炎診療方案》(第七版)中明確規定：“五、診斷標 準，(二)確診病例，疑似病例同時具備以下病原學或血清學證據之一者：1.實 時熒光RT-PCR檢測新型冠狀病毒核酸陽性；2.病毒基因測序，與已知的新型 冠狀病毒高度同源；3.血清新型冠狀病毒特異性IgM抗體和IgG抗體陽性； 血清新型冠狀病毒特異性IgG抗體由陰性轉為陽性或恢復期較急性期4倍及以 上。”根據CDC和WHO的推薦，針對新型冠狀病毒SARS-Cov-2的核酸診斷 一般是針對ORF1ab基因、N基因和E基因。目前，在臨床醫學檢測中，新型 冠狀病毒核酸檢測已全面開展，已有多款新型冠狀病毒核酸檢測試劑盒獲得了 批準。然而，在新型冠狀病毒肺炎疫情防控的關鍵時期，在各醫療機構開展的 核酸分子檢測過程中，報道了核酸檢測結果“假陰性”現象，嚴重地影響了疫 情的有效防控。與此同時，防止新型冠狀病毒核酸檢測結果“假陽性”對于疫 情防控，節約珍貴社會醫療資源也顯得相當重要。

在核酸檢測試劑盒中設置陽性、陰性質控品，或者在核酸檢測過程中添加 陽性、陰性質控品，以監測包括樣本處理過程在內的PCR實驗過程全流程， 是確保核酸檢測結果有效性，防止“假陰性”或“假陽性”檢測結果出現的最 有效手段。

目前，一般是選擇體外轉錄的RNA或者臨床陽性病毒作為質控品，用于 檢測方法性能評價。但是兩者都具有很明顯的缺點：1.體外轉錄的RNA作為 質控品時自身質量不穩定，易受環境中RNase破壞；對樣本處理過程不能有效 監控；2.臨床陽性病毒作為質控品，對于高致病性病毒(例：新型冠狀病毒、 SARS、MERS等)存在很高的生物安全風險。

本領域亟需新型冠狀病毒的低風險高精度檢測試劑和技術。

發明內容

本發明基于新型冠狀病毒肺炎疫情防控需求，針對目前核酸檢測常用質控 品存在的缺陷，利用裝甲RNA病毒技術制備的新型冠狀病毒(SARS-Cov-2) 陽性假病毒質控品和陰性假病毒質控品，應用到新型冠狀病毒(SARS-Cov-2) 臨床核酸檢測過程中，有效地監控整個核酸檢測過程，確保檢測結果的準確可 靠，為中國乃至全球新型冠狀病毒肺炎疫情防控發揮重要作用。

本發明提供一種核酸分子，包含選自(1)-(3)中一種、兩種或三種的 序列：