[發(fā)明專利]用于檢測(cè)胃癌的試劑盒及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010234920.5
• 申請(qǐng)日: 2020-03-30
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111549129B
• 公開(kāi)（公告）日: 2023-08-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄒繼華;林有升;李再忠;金雪卿
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 寧波美康盛德醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6886
• 分類號(hào): C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 寧波甬致專利代理有限公司 33228
• 代理人: 沈春紅

一種用于檢測(cè)胃癌的試劑盒及其應(yīng)用，其特征在于:該試劑盒包括血漿游離DNA甲基化處理試劑、PCR檢測(cè)預(yù)混液、PCR檢測(cè)核苷酸預(yù)混液、質(zhì)控品試劑，所述PCR檢測(cè)核苷酸預(yù)混液中含有核苷酸序列，具體包括：核苷酸序列01、核苷酸序列02、核苷酸序列03、核苷酸序列04、核苷酸序列05、核苷酸序列06、核苷酸序列07、核苷酸序列08、核苷酸序列09、核苷酸序列10、核苷酸序列11、核苷酸序列12、核苷酸序列13、核苷酸序列14。具有測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確度高、使用樣本量少、操作簡(jiǎn)單、檢測(cè)穩(wěn)定，一次可以對(duì)多個(gè)胃癌標(biāo)記物的甲基化異常進(jìn)行分析，檢測(cè)靈敏度高，可實(shí)現(xiàn)胃癌的早期發(fā)現(xiàn)、實(shí)時(shí)監(jiān)控，及胃癌復(fù)發(fā)的診斷的優(yōu)點(diǎn)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于腫瘤學(xué)生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種用于檢測(cè)胃癌的試劑盒及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

胃癌是東亞地區(qū)的特色癌癥，發(fā)病率可達(dá)32.1/10萬(wàn)人，死亡率則為13.2/10萬(wàn)人，其中日本和韓國(guó)的發(fā)病率高居世界榜首。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的報(bào)告，2018年全球有100萬(wàn)例新發(fā)胃癌，同時(shí)超過(guò)78萬(wàn)將會(huì)因胃癌而死亡，胃癌是發(fā)病率第五高、死亡率第三高的癌癥。在我國(guó)各種惡性腫瘤中發(fā)病率居首位，胃癌發(fā)病有明顯的地域性差別，在我國(guó)的西北與東部沿海地區(qū)胃癌發(fā)病率比南方地區(qū)明顯為高。好發(fā)病年齡在50歲以上，男女發(fā)病率之比為2：1。

飲食結(jié)構(gòu)不合理、生活作息紊亂、工作壓力過(guò)大以及病原微生物感染(如幽門(mén)螺桿菌)等原因，使得胃癌呈現(xiàn)年輕化傾向。胃癌可發(fā)生于胃的任何部位，其中半數(shù)以上發(fā)生于胃竇部，胃大彎、胃小彎及前后壁均可受累。絕大多數(shù)胃癌屬于腺癌，早期無(wú)明顯癥狀，或出現(xiàn)上腹不適、噯氣等非特異性癥狀，常與胃炎、胃潰瘍等胃慢性疾病癥狀相似，易被忽略。

我國(guó)胃癌病人5年生存率較低，具醫(yī)學(xué)雜志《柳葉刀》)發(fā)表的文章《2000-2014年全球癌癥生存率變化趨勢(shì)監(jiān)測(cè)研究報(bào)告》數(shù)據(jù)顯示，胃癌5年生存率日本為60.3％，韓國(guó)為68.9％，而我國(guó)僅35.9％。早期胃癌的5年生存率高達(dá)90％以上，晚期胃癌生存率大大降低。而早期胃癌與淺表性胃炎、消化不良等常見(jiàn)消化道疾病癥狀相似，如腹脹、噯氣、反酸、食欲下降等，出現(xiàn)較為明顯的特異癥狀，如消瘦、出血、黑便時(shí)，已經(jīng)到了中晚期。

目前胃癌發(fā)生或復(fù)發(fā)檢測(cè)的方法及其相關(guān)特點(diǎn)包括如下所述：(1)CT檢查：可顯示出胃癌是否累及胃壁向腔內(nèi)和腔外生長(zhǎng)等，但是臨床意義有限。(2)內(nèi)鏡超聲：可直接地看到胃壁的各層，了解腫瘤的全貌，有助于胃癌的診斷和TNM分期，但是臨床意義有效。(3)內(nèi)鏡診斷：纖維胃鏡對(duì)胃癌的診斷具有重要意義，可以發(fā)現(xiàn)早期胃癌，對(duì)良惡性潰瘍進(jìn)行鑒別，確定胃癌的類型和病灶浸潤(rùn)的范圍，可對(duì)癌前期病變進(jìn)行隨訪檢查。缺點(diǎn)在于患者依存性差、有一定感染風(fēng)險(xiǎn)。(4)癌胚抗原(CEA)，糖類抗原19-9(CA19-9)，糖類抗原72-4(CA72-4)，胃蛋白酶原等：常規(guī)腫瘤標(biāo)志物，對(duì)腫瘤的診斷有輔助作用，對(duì)于某項(xiàng)腫瘤標(biāo)志物升高，連續(xù)監(jiān)測(cè)動(dòng)態(tài)變化、聯(lián)合檢測(cè)能夠提高檢查的敏感性，聯(lián)合其他檢查有助于腫瘤的早期診斷。但是檢測(cè)靈敏度低、特異性差，臨床效用有限。

大量研究報(bào)道，癌細(xì)胞在破裂和死亡時(shí)，會(huì)釋放出循環(huán)腫瘤DNA(circulatingtumor?DNA，ctDNA)。ctDNA是一種胞外DNA，主要存在于血液(血清或血漿)、滑膜液和腦脊液等體液中。ctDNA釋放入血的機(jī)制目前仍無(wú)明確結(jié)論，現(xiàn)在普遍認(rèn)為細(xì)胞的凋亡和壞死為血液內(nèi)ctDNA的主要來(lái)源。近年來(lái)，大量ctDNA檢測(cè)在腫瘤診斷、治療中的研究被報(bào)道。ctDNA片段化較為嚴(yán)重，使用毛細(xì)管電泳檢測(cè)可以發(fā)現(xiàn)主峰在160-180bp左右的彌散帶。同時(shí)，血液中ctDNA含量較低，研究報(bào)道每毫升血液中有5-20ng，雖然也有文獻(xiàn)報(bào)道更高含量的樣本。但是，這樣普遍的含量范圍給檢測(cè)造成很大難題，需要有較高靈敏度的檢測(cè)才有較好的檢測(cè)效果。部分公司開(kāi)發(fā)的檢測(cè)為了達(dá)到理想的檢測(cè)效果，使用多至10ml甚至20ml的采血量，而患者對(duì)采血量多的檢測(cè)會(huì)有排斥心理，所以使用較少樣本量完成檢測(cè)至關(guān)重要。

發(fā)明內(nèi)容