[發明專利]一種用于模擬肝癌環境的脫細胞化支架模板

有效

• 申請號: 202010233515.1
• 申請日: 2020-03-30
• 公開（公告）號: CN111349598B
• 公開（公告）日: 2023-05-23
• 發明（設計）人: 張進;林哲;鄭輝東;何晶晶;劉寧;李飛翰
• 申請（專利權）人: 福州大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12N5/09
• 代理公司: 福州元創專利商標代理有限公司 35100
• 代理人: 修斯文;蔡學俊

1.一種用于模擬肝癌環境的脫細胞化支架模板，其特征在于：其制備方法包括以下步驟：

（1）將新鮮動物肝臟反復凍融，切片后用去離子水反復洗滌，然后用氨水和Triton?X-100的混合溶液進行脫細胞處理，再用去離子水磁力攪拌洗滌至中性，pH=7.4的PBS溶液浸泡，得到脫細胞支架前體P-DECM；

（2）將步驟（1）制得的P-DECM用圓形模具取出一個圓柱體，冷凍后切成圓片，得到DECM；

（3）將步驟（2）得到的DECM吸附在載玻片上，將PDMS固化在DECM邊緣形成“河堤”，?并在DECM中放置一個直徑為DECM直徑一半的圓環，使DECM分割為內圓和外環兩部分；

（4）在內圓部分種植HepG2細胞，在外環部分種植LO2細胞，然后在DECM上加入DMEM培養基，在37?℃、5%CO₂環境中孵育24?h至細胞貼壁；

（5）取出放置在DECM中的圓環，加入待測試的靶向藥物載體，進行藥物靶向治療的研究；

步驟（1）脫細胞處理時，所用混合溶液中氨水的體積濃度為0.01%?~20%，Triton?X-100的體積濃度為0.1%?~30%，攪拌時間為1?h~7?d，攪拌速度為50~1200?rpm；

當步驟（5）所用靶向藥物載體兼具磁性時，則將一圓形吸鐵石隔著載玻片置于HepG2細胞所在位置，以進行藥物磁性靶向研究；所述圓形吸鐵石的直徑應與圓環直徑一致。

2.根據權利要求1所述的脫細胞化支架模板，其特征在于：步驟（1）新鮮動物肝臟反復凍融的次數為1~10次，切片的厚度為0.5~5.5?cm；

去離子水洗滌的次數為1~20次，磁力攪拌轉速為50~1200?rpm。

3.根據權利要求1所述的脫細胞化支架模板，其特征在于：步驟（2）中所得DECM的厚度為1?μm~5?cm，其直徑應小于所使用載玻片的直徑。

4.根據權利要求1所述的脫細胞化支架模板，其特征在于：具有磁性的靶向藥物載體的制備方法為：

a）將DPPC、DPPE、DPPA、DSPE-PEG?2000、順磁性納米材料溶于甲醇和氯仿的混合溶液中，超聲得到溶液S1；

b）將步驟a）得到的溶液S1旋蒸成膜，得到脂質體囊泡包裹的順磁性納米材料前體P-PMNBs；

c）將甘油、PBS和嵌段式聚醚F-68混合得水合液S2；

d）將步驟c）得到的水合液S2加入到步驟b）得到的P-PMNBs中，超聲溶解，得到脂質體囊泡包裹的順磁性納米材料溶液；

e）將抗癌藥物加入到步驟d）得到的脂質體囊泡包裹的順磁性納米材料溶液中，經油浴后，在全氟丙烷氣氛中震蕩、離心、洗滌，得到最終材料PMNBs/ACD。

5.根據權利要求4所述的脫細胞化支架模板，其特征在于：步驟a）所得溶液S1中，DPPC的濃度為0.002~10?mg/mL，DPPE的濃度為0.002~10?mg/mL，DPPA的濃度為0.002~10?mg/mL，DSPE-PEG?2000的濃度為0.002~10?mg/mL，順磁性納米材料的濃度為0.002~100?mg/mL；

所述順磁性納米材料包括Fe₃O₄、Pt、Li；

所用混合溶液中甲醇和氯仿的體積比為0.1~200:1。

6.根據權利要求4所述的脫細胞化支架模板，其特征在于：步驟b）中旋蒸成膜的時間為5?min~3?h。

7.根據權利要求4所述的脫細胞化支架模板，其特征在于：步驟c）所得水合液S2中甘油與PBS的體積比為0.00001~100:1，F-68的含量為0.005~50?mg/mL。

8.根據權利要求4所述的脫細胞化支架模板，其特征在于：步驟d）中，超聲溶解的時間為10?s~30?min。

9.根據權利要求4所述的脫細胞化支架模板，其特征在于：步驟e）中抗癌藥物的加入量為0.001~10?mg/mL；所述抗癌藥物包括阿霉素、紫杉醇、多西他賽；

油浴的溫度為20~120?℃，時間為10?min~5?h；

全氟丙烷氣氛中震蕩的時間為10?min~8?h，轉速為100~1000?rpm；離心的時間為30?s~1?h，轉速為100~10000?rpm；所述洗滌是采用PBS離心清洗1~10次，離心速度為1000~30000rpm，離心時間為30?s~30?min。