[發明專利]一種(2S,3S)-2-羥基-4-苯基丁烷衍生物的制備方法

有效

• 申請號: 202010230686.9
• 申請日: 2020-03-27
• 公開（公告）號: CN111378703B
• 公開（公告）日: 2021-05-18
• 發明（設計）人: 楊衛華;談聰;張利坤;錢敏帆;金力;倪建洲;葛文強
• 申請（專利權）人: 長興制藥股份有限公司
• 主分類號: C12P13/02
• 分類號: C12P13/02;C07C269/08;C07C271/16
• 代理公司: 杭州裕陽聯合專利代理有限公司 33289
• 代理人: 顧晨

1.一種(2S,3S)-2-羥基-4-苯基丁烷衍生物的制備方法，其特征在于：將底物、羰基還原酶和過量的異丙醇在含有再生供氫輔因子的緩沖液中進行生物酶催化反應獲得轉化液，再經連續濃縮結晶獲得目標產物結晶；

所述底物為式（I）所示化合物，所述目標產物為式（II）所示化合物，其中，式（I）和式（II）中的R為相同的氨基保護基團；

其中，所述羰基還原酶的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示；所述異丙醇在反應體系的濃度為15-60% (m/V) ，所述底物的投料濃度為80-200g /L。

2.根據權利要求1所述的一種(2S,3S)-2-羥基-4-苯基丁烷衍生物的制備方法，其特征在于：所述異丙醇在反應體系的濃度為20-50% (m/V)。

3.根據權利要求2所述的一種(2S,3S)-2-羥基-4-苯基丁烷衍生物的制備方法，其特征在于：所述羰基還原酶與底物的質量比為0.03-0.1:1，所述羰基還原酶催化反應的溫度為35-45℃，緩沖液的pH為7-9。

4.根據權利要求3所述的一種(2S,3S)-2-羥基-4-苯基丁烷衍生物的制備方法，其特征在于：所述再生供氫輔因子為NAD⁺/NADP⁺，摩爾濃度為0.1-1.0 mmol/L。

5.根據權利要求4所述的一種(2S,3S)-2-羥基-4-苯基丁烷衍生物的制備方法，其特征在于：所述緩沖液為磷酸鉀緩沖液或磷酸鈉緩沖液，摩爾濃度為50-200 mmol/L，pH為8.0。

6.根據權利要求5所述的一種(2S,3S)-2-羥基-4-苯基丁烷衍生物的制備方法，其特征在于：反應體系中還加入0.01-0.05mol/L的鎂離子。

7.根據權利要求5或6所述的一種(2S,3S)-2-羥基-4-苯基丁烷衍生物的制備方法，其特征在于：所述氨基保護基團選自叔丁基羰基、芐氧羰基、芴甲氧羰基、烯丙氧羰基、三甲基硅乙氧羰基、鄰苯二甲酰基、對甲苯磺?；⑷阴；?、鄰(對)硝基苯磺酰基、苯甲酰基、三苯甲基、2,4-二甲氧基芐基。

8.根據權利要求7所述的一種(2S,3S)-2-羥基-4-苯基丁烷衍生物的制備方法，其特征在于：所述生物催化反應24小時的轉化率不低于95.0%，所述目標產物的de值不低于99.5%。

9.根據權利要求1或8所述的一種(2S,3S)-2-羥基-4-苯基丁烷衍生物的制備方法，其特征在于，所述連續濃縮結晶的步驟是：

（1）向所述轉化液中加入水，將有機相析出的產物離心，得到粗品；

（2）將粗品用甲醇復溶，40-50℃恒溫下過濾，取清液經降膜蒸發器連續濃縮結晶；連續濃縮結晶的初始料液溫度為40-48℃，當有晶體析出時將料液溫度降為34-38℃；

（3）降膜蒸發后離心過濾獲得目標產物結晶，母液回收到降膜蒸發器內繼續濃縮結晶。

10.根據權利要求9所述的一種(2S,3S)-2-羥基-4-苯基丁烷衍生物的制備方法，其特征在于：所述目標產物結晶的結晶度不小于95%，純度不低于99.95%，含量不低于99%。