[發明專利]一種修復呼吸系統損傷的干細胞條件培養上清液及其制劑

在審

• 申請號: 202010229600.0
• 申請日: 2020-03-27
• 公開（公告）號: CN111394304A
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發明（設計）人: 曹毓琳;滕睿頔;趙宇紅;林俊堂;張興鵬;白志惠;朱姿英;王文威
• 申請（專利權）人: 北京臻溪谷醫學研究中心（有限合伙）
• 主分類號: C12N5/0775
• 分類號: C12N5/0775;A61K36/481;A61K35/28;A61K35/51;A61K9/12;A61K9/72;A61P11/02;A61P11/00;A61K31/045;A61K31/722
• 代理公司: 北京愛普納杰專利代理事務所(特殊普通合伙) 11419
• 代理人: 王玉松;宋丹丹

本發明提供了一種修復呼吸系統損傷的干細胞條件培養上清液，該干細胞條件培養上清液通過以下步驟制備而成：取傳達次數為5?8代的間充質干細胞，去除原培養基，加入與原培養基等量的條件培養基放置于培養箱中，在溫度為37.0±0.5℃、CO2濃度為5.0±0.2％、飽和濕度的條件下培養24小時，條件培養基為含工作濃度為0.005?0.015M的HEPES緩沖鹽溶液的無酚紅DMEM培養基，收集上清液，離心15?25min，棄去沉淀，即得干細胞條件培養上清液；本發明提供的干細胞條件培養上清液具有修復呼吸系統損傷的功效。

技術領域

本發明屬于中藥及干細胞技術領域技術領域，特別涉及一種修復呼吸系統損傷的干細胞條件培養上清液及其制劑。

背景技術

心血管疾病、腫瘤、代謝性疾病和呼吸系統疾病，已經成為威脅全世界的四大慢性疾病，對于前三者，都得到了很好的重視，唯獨呼吸系統疾病在老百姓當中的知曉率依然很低，呼吸系統疾病包含：哮喘病、氣管炎、支氣管炎、慢性阻塞性肺疾病、肺心病、肺結核等，呼吸系統疾病(不包括肺癌)在城市的死亡病因中占第四位(13.1％)，在農村占第三位(16.4％)，由于大氣污染、吸煙、工業經濟發展導致的理化因子、生物因子吸入、感染性疾病以及人口年齡老化等因素，使近年來呼吸系統疾病如肺癌、支氣管哮喘的發病率明顯增加，慢性阻塞性肺疾病居高不下(40歲以上人群中超過8％)，從2002年底以來，在中國及世界范圍內暴發的傳染性非典型肺炎(嚴重急性呼吸綜合征，SARS，COVID-19)疫情，由于多發生于中青年，其傳染性強，病死率高，又缺乏針對性的藥物，目前在多個國家出現的人禽流感病死率超過60％。而禽流感病毒侵人體內主要的靶器官也是肺，這正說明呼吸系統疾病對中國人民健康危害仍是很大的，其防治任務艱巨。

相較西醫對癥治療的方式，中醫、生物治療已成為治療慢性、損傷性疾病的新策略，能起到修復受損細胞結構及功能的作用，因此我們將結合中藥有效成分和生物治療，制備一種修復呼吸系統損傷的制品。

發明內容

為了解決以上技術問題，本發明提供了一種修復呼吸系統損傷的干細胞條件培養上清液，該干細胞條件培養上清液通過以下步驟制備而成：取傳達次數為5-8代的間充質干細胞，去除原培養基，加入與原培養基等量的條件培養基放置于培養箱中，在溫度為37.0±0.5℃、CO2濃度為5.0±0.2％、飽和濕度的條件下培養24小時，條件培養基為含工作濃度為0.005-0.015M的HEPES緩沖鹽溶液的無酚紅DMEM培養基，收集上清液，離心15-25min，棄去沉淀，即得干細胞條件培養上清液。

優選地，去除原培養基后使用0.9％氯化鈉注射液清洗，然后再加入條件培養基培養。

進一步地，間充質干細胞傳代及上清收獲時的細胞密度均在90％以上。

其中，間充質干細胞包括所有間充質干細胞，如臍帶間充質干細胞；本發明提供的方法制備的干細胞條件培養上清液能夠調節免疫，針對過度炎癥反應有顯著調節作用，同時也能起到修復損傷、抗衰老的作用，因此上清液本身能夠起到修復呼吸系統損傷的作用，既可單獨使用，也可以與其他活性成分合用，也可以與輔料制備其他劑型使用，使用以上方法制備的干細胞條件培養上清液中含有多種活性成分：包括TSG-6、HGF、GM-CSF、KGF、VEGF、血管生成素-1(Ang-1)、前列腺素E2(PGE2)、白細胞介素-10(IL-10)等多種細胞因子，MSC還通過釋放大量的細胞外小囊泡(EV)參與肺組織的修復，這些囊泡包裹著細胞因子、生長因子、信號脂質、功能性mRNA和microRNAs，這些有效成分均會隨著培養過程釋放到條件培養上清液中。

本發明還提供了一種由修復呼吸系統損傷的干細胞條件培養上清液和附加成分制成的鼻咽噴霧敷劑，附加成分主要包括人參與黃芪的混合提取物和生理鹽水，干細胞條件培養上清液和人參與黃芪的混合提取物在生理鹽水中的體積濃度分別為8％-10％、1％-4％。