[發明專利]一種石蒜屬種子的電化學圖譜采集方法

有效

• 申請號: 202010220183.3
• 申請日: 2020-03-25
• 公開（公告）號: CN111413392B
• 公開（公告）日: 2022-05-13
• 發明（設計）人: 傅力
• 申請（專利權）人: 杭州電子科技大學
• 主分類號: G01N27/48
• 分類號: G01N27/48;G01N27/30;G01N1/28;G01N1/38
• 代理公司: 杭州君度專利代理事務所(特殊普通合伙) 33240
• 代理人: 楊舟濤

本發明公開了一種石蒜屬種子的電化學圖譜采集方法，本發明將石蒜屬種子的胚剖取出來，用手持式組織研磨棒在溶劑中進行破碎處理，將一定量振蕩處理后的溶液移入不同的緩沖溶液中，使其成為較為穩定的懸濁液，再進行脈沖伏安法掃描采集電化學信號，構建電化學圖譜。本發明提供的采集方法簡便易操作，能快速構建出石蒜屬種子的電化學圖譜。本發明對石蒜屬種子的分析取用的是種子內的胚，避免了種子內大量淀粉對電化學信號采集的影響；本方法在溶劑中對胚進行研磨處理，使其在溶劑中均勻分布；在采集石蒜屬種子的電化學圖譜過程中，所使用的設備以及試劑成本較低。

技術領域

本發明屬于植物電化學分析技術領域，特別是涉及一種石蒜屬種子的電化學圖譜采集方法。

背景技術

石蒜屬植物是多年生草本植物，在世界范圍內約有20余種，原產于中國和日本，少數產于緬甸和朝鮮。我國約有15種，主要分布于長江流域，尤以溫暖地區種類較多。石蒜不僅具有良好的觀賞價值，還是具有可觀的藥用價值。石蒜屬植物的鱗莖中含有石蒜堿、加蘭他敏、力可拉敏等多種生物堿，其中加蘭他敏是治療阿爾茲海默癥、小兒麻痹后遺癥藥物中的有效成分。

目前，國內對于石蒜屬植物的研究主要集中在遺傳多樣性分析、組織培養體系的建立和生物堿提取方法等方面，對石蒜屬植物種子的相關研究報道較少。對于其遺傳多樣性的分析，目前采取的方法主要有形態性狀估測法、細胞學標記法、生化標記法、DNA分子標記法等。形態性狀估測法的不穩定因素較多，細胞學標記法耗力多、耗時長，生化標記法在應用上存在限定范圍，DNA分子標記法則有實驗成本高、檢測步驟復雜等缺點。

植物種子中包含了大量與之相關的遺傳信息。石蒜屬植物屬于被子植物，可通過種子繁殖，因此對石蒜種子的遺傳信息進行采集分析是一種較為科學的石蒜屬植物分析方法。

例如，中國專利CN108456719A公開了一種分析辣木親緣關系的反應體系、試劑盒及其應用方法，該方法通過SRAP分子標記技術從170對引物中篩選出13對多態性好、清晰度高的引物，對18份辣木DNA進行標記，并使用NTSYS軟件完成對數據的分析和UPGMA聚類，進一步研究辣木親緣關系和遺傳多樣性，但是該方法分析過程復雜，不利于推廣應用。

本發明針對市場上現有技術的缺點與不足，設計了一種針對石蒜屬種子的電化學圖譜采集方法。該方法能夠快速采集石蒜屬種子中的遺傳物質信息。

發明內容

本發明的目的在于提供一種石蒜屬種子的電化學圖譜采集方法。本發明的方法具有采集速度快、實驗成本低、簡便高效等優點。

為了達到上述的目的，本發明采取以下技術方案：

一種石蒜屬種子的電化學圖譜采集方法，包括如下步驟：

(1)將待測樣品的種子剖開后，取種子的胚分別加入兩種不同溶劑中，進行研磨超聲萃取，得到兩種不同的萃取液；所述胚與溶劑的加入量的比值為(1～2)個：(20～50)μL；

(2)用移液槍移取一定量的兩種萃取液，分別加至兩種固定量的緩沖溶液中，進行超聲振蕩使溶液中各組分混合均勻，形成較為穩定的懸濁液；緩沖溶液為磷酸緩沖溶液、醋酸-醋酸鈉緩沖溶液或者檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖溶液中的一種，緩沖溶液的濃度為0.1mol/L～0.3mol/L；種胚萃取液和緩沖溶液的體積比為(3～5):(15000～20000)；

(3)將玻碳電極、鉑電極、銀/氯化銀電極組成的三電極體系分別插入至步驟(2)的四種懸濁液中，通過脈沖伏安法掃描采集樣品電化學信號；脈沖伏安法掃描的掃描區間為1.6～0V；

(4)將步驟(3)經多次掃描得到的電化學信號進行分析處理，疊加構建樣品的電化學圖譜。

作為優選，所述步驟(1)中溶劑為水、無水乙醇或乙二醇。

作為優選，所述步驟(1)中研磨是在溶劑中對植物組織進行破碎處理。