[發明專利]一種SARS-CoV-2抗體檢測方法

在審

• 申請號: 202010218584.5
• 申請日: 2020-03-25
• 公開（公告）號: CN111474345A
• 公開（公告）日: 2020-07-31
• 發明（設計）人: 趙風強;吳妤;鄔曉樂
• 申請（專利權）人: 北京博奧森生物技術有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/535;G01N33/543;G01N33/577
• 代理公司: 北京眾合誠成知識產權代理有限公司 11246
• 代理人: 鄒仕娟

本發明公開了一種SARS?CoV?2抗體檢測方法：對重組SARS?CoV?2Nucleocapsid protein進行辣根過氧化物酶標記，同時選用Anti?SARS?CoV?2抗體或優勢抗體包被酶聯板并封閉，依據競爭ELISA原理，將待測樣本及酶標抗原同時加入酶聯板試驗孔內，室溫孵育，徹底洗板后，加入底物TMB，避光顯色，最后終止反應并測定450nm處吸光值，通過計算抗體抑制率評估樣本中抗體的效價。本發明的方法選用SARS?CoV?2中相對保守的N蛋白及其特異性抗體作為原料，很大程度上避免與樣本基質存在交叉反應，與傳統抗體檢測方法比，實現了更快速，更簡便，更靈敏的完成Anti?SARS?CoV?2特異性抗體的檢測，兼具特異性、敏感性、準確性和精密性，有重要的應用前景及價值。

技術領域

本發明涉及一種SARS-CoV-2抗體檢測方法,屬于抗體檢測技術領域。

背景技術

SARS-CoV-2屬于冠狀病毒科β屬。有科研團隊發現SARS-CoV-2全基因組與SARS-CoV (嚴重急性呼吸綜合征)的序列同源性約76％，而與菊頭蝠中的蝙蝠冠狀病毒BatCoVRaTG13 的序列同源性高達96％，同時該團隊通過對其保守的7個非結構蛋白進行對比，確認 SARS-CoV-2和SARS-CoV進入細胞的受體均為ACE2。

冠狀病毒的結構由雙層脂質的囊膜組成，包含刺突蛋白(Spike glycoprotein，S)、包 膜蛋白(Envelope protein，E)、膜蛋白(Membrane glycoprotein，M)以及核衣殼蛋白 (Nucleocapsid protein，N)。其中S蛋白和N蛋白是其中最重要的靶點蛋白。S蛋白位于病毒最外層，與病毒的傳染能力相關。S蛋白承擔病毒與宿主細胞膜受體結合及膜融合的功能，是宿主中和抗體重要作用位點以及疫苗設計的關鍵靶點。N蛋白是冠狀病毒中含量最豐富蛋白，具有高度保守性。N蛋白是一種高度免疫原性的磷蛋白，在病毒體組裝過程中，N蛋白與病毒RNA結合形成螺旋核衣殼；且與病毒基因組復制和調節細胞信號通路有關，因此N蛋白常作為冠狀病毒診斷檢測工具，是免疫學快速診斷試劑的核心原料。

臨床上，新型冠狀病毒肺炎(novel coronaviru spneumonia，NCP)患者潛伏期1至14 天，多為3至7天，以發熱、乏力、干咳為主要表現，少數患者伴有鼻塞、流涕、咽痛和腹 瀉等癥狀。重癥患者多在發病7天后出現呼吸困難和(或)低氧血癥，嚴重者快速進展為急 性呼吸窘迫綜合征、膿毒癥休克、難以糾正的代謝性酸中毒和出、凝血功能障礙等，值得注 意的是重型、危重型患者病程中可表現為中低熱，甚至無明顯發熱。

目前對于新型冠狀病毒的檢測技術主要有：核酸檢測、免疫學檢測(抗原或抗體檢測)、 病毒分離鑒定等。綜合運用各項檢測工具，實現快速高效的檢測，同時結合臨床影像學檢查 結果，才能有效縮短新型冠狀病毒肺炎患者的確診周期。在眾多檢測技術中，特異性抗體的 檢測可通過對血液、血清等樣本中針對SARS-CoV-2 N蛋白抗體IgM、IgG含量進行檢測，具 有取樣相對比較便捷，檢測時間較短，對檢測環境要求不高等優點。然而目前抗SARS-CoV-2 N蛋白抗體IgM與IgG的檢測多采用膠體金層析法，但SARS-CoV-2新型冠狀病毒與同屬冠狀 病毒同源性較高，易存在交叉和非特異性反應。因此，對新型冠狀病毒抗體檢測方法的研發 及優化，有重要的應用前景及科研價值。

發明內容

針對上述現有技術，本發明提供了一種SARS-CoV-2抗體檢測方法。

本發明是通過以下技術方案實現的：

一種SARS-CoV-2抗體檢測方法，為非診斷或治療目的的檢測方法，如下：