[發明專利]聯合檢測新型冠狀病毒IgM/IgG抗體的膠體金試劑盒及制備方法

有效

• 申請號: 202010218543.6
• 申請日: 2020-03-25
• 公開（公告）號: CN111089962B
• 公開（公告）日: 2020-07-17
• 發明（設計）人: 王勝嵐;馬玉蘭;吳偉銘;肖慧芳;范潔云
• 申請（專利權）人: 中山生物工程有限公司
• 主分類號: G01N33/569
• 分類號: G01N33/569;G01N33/558;G01N33/532
• 代理公司: 中山市捷凱專利商標代理事務所(特殊普通合伙) 44327
• 代理人: 楊連華

本發明公開了聯合檢測新型冠狀病毒IgM/IgG抗體的膠體金試劑盒及其制備方法，涉及生物醫藥領域，采用抗原抗體夾心法和膠體金免疫層析法原理定性檢測人血清或血漿中是否存在抗新型冠狀病毒核衣殼蛋白IgM抗體和/或抗新型冠狀病毒核衣殼蛋白IgG抗體，運用膠體金標記含有6×His標記的新型冠狀病毒核衣殼蛋白形成金標N蛋白后吸附在金標墊上，以含有6×His標記的新型冠狀病毒核衣殼蛋白作為指示標記物，在NC膜的IgM檢測線上包被鼠抗人u鏈單抗、在IgG檢測線上包被鼠抗人IgG單抗及在NC膜的質控線上包被鼠抗6×His單抗，實現對抗新型冠狀病毒核衣殼蛋白IgM/IgG抗體定性檢測，具有使用方便、靈敏度高、檢測時間短的優點。

技術領域

本發明屬于生物醫藥領域，涉及聯合檢測新型冠狀病毒IgM/IgG抗體的膠體金試劑盒及其制備方法，具體地說是一種應用夾心法原理的膠體金免疫層析法實現聯合對血液中抗新型冠狀病毒核衣殼蛋白IgM抗體和/或抗新型冠狀病毒核衣殼蛋白IgG抗體進行定性檢測的試劑盒。

背景技術

2019年12月以來，出現了新型冠狀病毒（2019?nCoV）疫情。其常見體征有發熱、乏力、干咳、逐漸出現呼吸困難，而部分患者病癥狀輕微，甚至存在無臨床癥狀的無癥狀患者。具備人傳人的特點，一般潛伏期1?14天，且潛伏期具有傳染性，而無癥狀感染者也可能成為傳染源，其主要通過呼吸道飛沫和密切接觸傳染傳播，人群普遍易感。

疫情發展至今，仍有不少疑似病例因為檢測效率不足等原因尚未確診，如何大規模快速篩查疑似病例，供臨床醫生快速判斷是否為新型冠狀病毒肺炎，以便于快速隔離免于傳染給更多的人，是亟需解決的問題。

發明內容

本發明的目的在于提供一種快速、簡單、可靠、成本低廉、靈敏度高的聯合檢測新型冠狀病毒IgM/IgG抗體的膠體金試劑盒。

本發明的另一個目的是提供一種聯合檢測新型冠狀病毒IgM/IgG抗體的膠體金試劑盒的制備方法。

本發明提供技術方案如下：一種聯合檢測新型冠狀病毒IgM/IgG抗體的膠體金試劑盒，包括盒體、位于所述盒體內的粘貼支架，所述粘貼支架上延長度方向依次粘貼有樣本墊、金標墊、NC膜、吸樣墊，所述NC膜上靠近所述金標墊側設有IgM檢測線和IgG檢測線，所述NC膜上靠近所述吸樣墊側設有質控線，所述金標墊含有金標N蛋白，所述金標N蛋白為由膠體金標記的含有6×His標記的新型冠狀病毒核衣殼蛋白；

所述IgM檢測線上包被有鼠抗人u鏈單抗；

所述IgG檢測線上包被有鼠抗人IgG單抗；

所述質控線上包被有鼠抗6×His單抗。

作為本發明的進一步改進，所述金標N蛋白的制備方法包括以下步驟：

S101、膠體金制備：取2mL1wt%氯金酸加入100mL水溶液中，加熱至沸騰，再加入2-5mL1wt%檸檬酸三鈉混勻，煮沸待膠體金溶液顏色由藍經紫變紫紅后，冷卻；

S102、金標液制備：取1mL膠體金加入100μL0.1M、pH7.2的PB，混勻后加入0.1MNaOH溶液調節pH值至7.2-7.6，加入15-25μg含有6×His標記的新型冠狀病毒核衣殼蛋白充分混勻，再加入100μL10vol%的牛血清白蛋白混勻；

S103、金標液純化：將金標液和金標液混合離心后棄去上清，加入含有20wt%蔗糖的金標復溶液溶解，即得。

作為本發明的進一步改進，所述金標N蛋白中膠體金的粒徑為15-30nm。

作為本發明的進一步改進，所述質控線上鼠抗6×His單抗的包被濃度為0.75-1mg/ml，所述IgM檢測線上鼠抗人u鏈單抗包被濃度為1.0－1.5mg/ml，所述IgG檢測線上鼠抗人IgG單抗包被濃度為1.0－1.5mg/ml。