[發(fā)明專利]一種脂聯(lián)素測(cè)定試劑及制備方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010218491.2
• 申請(qǐng)日: 2020-03-25
• 公開（公告）號(hào): CN111337692B
• 公開（公告）日: 2023-10-03
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 萬(wàn)蒙;周惠良;陳銀芳
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江西樂成生物醫(yī)療有限公司
• 主分類號(hào): G01N33/74
• 分類號(hào): G01N33/74;G01N33/543
• 代理公司: 北京清亦華知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11201
• 代理人: 何世磊

本發(fā)明公開了一種脂聯(lián)素測(cè)定試劑，包括：第一試劑，包括第一磷酸鹽、氯化鈉和聚乙二醇；第二試劑，包括第二磷酸鹽、氯化鈉、海藻糖、丙三醇、表面活性劑和乳膠顆粒，所述乳膠顆粒包被脂聯(lián)素抗體。試劑分為第一試劑和第二試劑，且第一試劑和第二試劑采用不同的磷酸鹽，提高了試劑的靈敏度，海藻糖、丙三醇和表面活性劑提高了脂聯(lián)素測(cè)定試劑的穩(wěn)定性。上述脂聯(lián)素測(cè)定試劑的制備方法，包括以下步驟：(1)將第一磷酸鹽、氯化鈉和聚乙二醇溶于蒸餾水，混合均勻，得第一試劑；(2)將所述第二磷酸鹽、氯化鈉溶于蒸餾水，調(diào)節(jié)溫度至20～50℃，持續(xù)通入二氧化碳，攪拌1～2h，用來清洗乳膠；(3)加入海藻糖、丙三醇和表面活性劑，得第二試劑。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種脂聯(lián)素測(cè)定試劑及制備方法。

背景技術(shù)

脂聯(lián)素測(cè)定試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿中的脂聯(lián)素含量，臨床上用于評(píng)估2型糖尿病和心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)。

脂聯(lián)素常用的檢測(cè)方法有：放射免疫法(RIA)、酶聯(lián)免疫法(ELISA)、膠乳顆粒增強(qiáng)免疫比濁(PETIA)等方法，其中膠乳顆粒增強(qiáng)免疫比濁法應(yīng)用最為廣泛。脂聯(lián)素試劑一般分為試劑R1和試劑R2，通過兩種試劑獲得樣本中的脂聯(lián)素含量。

現(xiàn)有的膠乳顆粒增強(qiáng)免疫比濁法多為簡(jiǎn)單地將抗體與聚苯乙烯乳膠微球交聯(lián)，靈敏度較低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的在于提出一種測(cè)量靈敏度高的脂聯(lián)素測(cè)定試劑。

一種脂聯(lián)素測(cè)定試劑，包括以下組分：

第一試劑，包括第一磷酸鹽、氯化鈉和聚乙二醇；

第二試劑，包括第二磷酸鹽、氯化鈉、海藻糖、丙三醇、表面活性劑和乳膠顆粒，所述乳膠顆粒包被脂聯(lián)素抗體。

本發(fā)明的有益效果是：試劑分為第一試劑和第二試劑，其中乳膠顆粒位于第二試劑中，且第一試劑和第二試劑采用不同的磷酸鹽，提高了試劑的靈敏度，海藻糖、丙三醇和表面活性劑提高了脂聯(lián)素測(cè)定試劑的穩(wěn)定性。

另外，根據(jù)本發(fā)明提供的脂聯(lián)素測(cè)定試劑，還可以具有如下附加的技術(shù)特征：

進(jìn)一步地，所述第一磷酸鹽和第二磷酸鹽的濃度分別為15～50mmol/L和30～100mmol/L，所述第一磷酸鹽包括磷酸氫鈉和碳酸氫鈉，二者質(zhì)量比為10:1～3，所述第二磷酸鹽包括磷酸二氫鉀和次氯酸鉀，二者質(zhì)量比為10:0.5～2，所述表面活性劑為山梨醇，質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1～10％。

進(jìn)一步地，所述第一試劑和所述第二試劑的所述氯化鈉的濃度均為1～20g/L，所述聚乙二醇的濃度為10～50g/L，所述海藻糖的濃度為5～10g/L，所述丙三醇的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1～10％，所述乳膠顆粒的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.1～1％。

本發(fā)明的另一個(gè)目的在于提出一種采用上述脂聯(lián)素測(cè)定試劑的制備方法，包括以下步驟：

(1)將第一磷酸鹽、氯化鈉和聚乙二醇溶于蒸餾水，混合均勻，定容，得第一試劑；

(2)制備包被脂聯(lián)素抗體的膠乳，將所述第二磷酸鹽和氯化鈉溶于蒸餾水，得混合溶液，調(diào)節(jié)所述混合溶液的溫度至20～50℃，向所述混合溶液中持續(xù)通入二氧化碳，攪拌1～2h，利用所述混合溶液清洗所述乳膠；

(3)向所述混合溶液中加入海藻糖、丙三醇和表面活性劑，混合均勻，蒸餾濃縮，得第二試劑。

進(jìn)一步地，所述步驟(2)中的制備包被脂聯(lián)素抗體的膠乳的步驟包括：

i.準(zhǔn)備粒徑為50～300nm的羧基乳膠微球，加入2-嗎啉乙磺酸，混合均勻，重復(fù)多次離心除上清液，得清洗膠乳；

ii.向所述清洗膠乳中加入2-嗎啉乙磺酸，執(zhí)行水浴超聲使微球呈單分散狀態(tài)，再加入活性劑活化膠乳，震蕩反應(yīng)10～20min，得活化乳膠；