[發明專利]一種酶轉化法制備α-熊果苷的工藝方法

在審

• 申請號: 202010216264.6
• 申請日: 2020-03-25
• 公開（公告）號: CN111394411A
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發明（設計）人: 楊波;墨玉欣;徐勇虎
• 申請（專利權）人: 南京安佰思生物科技有限公司
• 主分類號: C12P19/44
• 分類號: C12P19/44;C12P19/18;C12P19/14;C12N11/14;C07H15/203;C07H1/00
• 代理公司: 天津展譽專利代理有限公司 12221
• 代理人: 劉永會

本發明涉及化妝品原材料制備技術領域，尤其涉及一種酶轉化法制備α?熊果苷的工藝方法，其包括如下工藝步驟：酶的固定化，以葡萄糖基轉化酶為催化的生物酶，將其固定在載體上制成固定化酶；酶轉化反應，以淀粉類物質作為糖基供體，對苯二酚作為糖基受體，加入固定化酶，在40?60℃下反應24?48h；離子交換樹脂純化，反應液通過離子交換樹脂除去對苯二酚；納濾除雜，將反應液通過納濾膜過濾除葡萄糖，再通過活性炭吸附去除色素；結晶純化，將料液蒸發濃縮至濃度為40～60％，一次降溫結晶得到α?熊果苷粗品，加水溶解α?熊果苷粗品，多次降溫結晶，得到純度99％以上的α?熊果苷。本發明提供的方法工藝流程操作簡單、成本較低且純度可控。

技術領域

本發明涉及化妝品原材料制備技術領域，尤其涉及一種酶轉化法制備α-熊果苷的工藝方法。

背景技術

α-熊果苷，其化學名為4-羥苯基-α-D吡喃葡萄糖苷，其氧苷鍵在空間的方向與β-熊果苷的方向相比正好相反。α-熊果苷對黑色素合成酶——酪氨酸酶具有很好的抑制作用，對人體肌膚的美白作用是β-熊果苷的10倍以上，并且不會抑制人體細胞的生長，無毒副作用。經研究發現α-熊果苷對紫外線灼傷導致的瘢痕有較好的治療功效，有較好的抗炎、修復和美白的作用。2000年以來，許多國際知名的化妝品牌，如日本知名品牌DHC、資生堂等，開始使用α熊果苷作為美白產品的增白劑。α-熊果苷比β-熊果苷穩定，能夠比較方便的添加到美白化妝品中。

目前合成熊果苷的方法主要有四種，有機合成法、植物提取法、生物轉化法和酶合成法。其中有機合成法和植物提取法主要獲得β-熊果苷，而α-熊果苷目前獲取途徑主要是生物轉化法和酶合成法。利用一分子的葡萄糖和一分子的氫醌結合形成單一的α-熊果苷。

目前，國際上應用于美白化妝品中的α-熊果苷主要由日本江琦格力高工廠提供，江琦采用酶法轉化生產α-熊果苷，后提取工藝主要采用有機溶劑萃取分離未反應的對苯二酚，層析柱吸附α-熊果苷及糖，采用不同濃度甲醇洗脫分離糖及糖苷(EP1260211A1)，由于后提取工藝過程復雜，成本較高，α-熊果苷的國際售價一直居高不下。國內也有一些公司生產α-熊果苷，主要采用黃單胞菌細胞催化法(CN200510080364)，后提取采用大孔吸附樹脂分離提純(CN200410090980.5)，亦使用有機溶劑洗脫，以及大量酸堿再生樹脂，生產成本較高，產品質量不穩定，難以實現大規模生產。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供工藝流程操作簡單、成本較低且純度可控的一種酶轉化法制備α-熊果苷的工藝方法。

本發明是通過以下技術方案予以實現：

一種酶轉化法制備α-熊果苷的工藝方法，其包括如下工藝步驟：

第一步，酶的固定化，以葡萄糖基轉化酶為催化的生物酶，將其固定在載體上制成固定化酶；

第二步，酶轉化反應，以淀粉類物質作為糖基供體，對苯二酚作為糖基受體，控制反應溶液的pH為5.5-6.5，攪拌均勻后，加入第一步制得的固定化酶，在40-60℃下反應24-48h；

第三步，離子交換樹脂純化，將第二步反應液通過離子交換樹脂除去未反應掉的對苯二酚；

第四步，納濾除雜，將第三步反應液通過納濾膜過濾除去多余的葡萄糖，再通過活性炭吸附去除色素等雜質；

第五步，結晶純化，將純化并納濾除雜后的料液通過減壓蒸發濃縮至濃度為40～60％，將濃縮液進行一次降溫結晶得到α-熊果苷粗品，加水溶解α-熊果苷粗品，進行多次降溫結晶，得到純度99％以上的α-熊果苷。

具體的，用于固定化酶的載體是指只要可以將生物酶吸附在其表面，且生物酶不失活的物質均可，包括氧化鋁、硅藻土、多孔陶瓷、多孔玻璃。