[發(fā)明專利]一種抑菌蛋白及其編碼基因、用途和菌株

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010215104.X
• 申請(qǐng)日: 2020-03-24
• 公開（公告）號(hào): CN112094833B
• 公開（公告）日: 2022-12-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王建榮;王鵬;王玲玲;詹仕賢
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 深圳市康佑生物技術(shù)有限公司
• 主分類號(hào): C12N9/36
• 分類號(hào): C12N9/36;C12N15/56;C12N1/19;A61P31/04;C12R1/84
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本發(fā)明公開了一種抑菌蛋白及其編碼基因、用途和菌株法。本發(fā)明以雞溶菌酶為出發(fā)模板，通過理性設(shè)計(jì)將蝎源抗菌肽IsCT的氨基酸序列疊加到雞溶菌酶蛋白的N端，同時(shí)定向引入抗氧化肽和氨基酸接頭獲得了突變體LyIc；然后根據(jù)畢赤酵母密碼子偏好性，采取全基因合成技術(shù)獲得突變體LyIc對(duì)應(yīng)的基因lys?Is，lys?Is的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示；再次將溶菌酶突變體基因lys?Is連入表達(dá)載體pPICZαA，轉(zhuǎn)入畢赤酵母X33，發(fā)酵培養(yǎng)重組菌，分離純化溶菌酶突變體LyIc；最后對(duì)比分析溶菌酶突變體LyIc和原始溶菌酶對(duì)常見致病菌的抑菌效果。本發(fā)明的溶菌酶突變體LyIc對(duì)常見致病菌(大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄糖球菌)的抑菌效果得到有效提升，為雞溶菌酶的廣泛應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種抑菌蛋白及其編碼基因、用途和菌株。

背景技術(shù)

近年來隨著抗生素的濫用引發(fā)了許多問題如：超級(jí)耐藥菌的出現(xiàn)；抗生素殘留等。從可持續(xù)發(fā)展的角度出發(fā)，人類必須對(duì)抗生素的用法及用量進(jìn)行有效的控制。從90年代開始，國(guó)內(nèi)外許多研究人員開始尋找抗生素的替代物，經(jīng)過許多研究發(fā)現(xiàn)溶菌酶作為一種天然蛋白能夠有效的殺滅許多微生物，因此其有望成為抗生素的替代物應(yīng)用于許多領(lǐng)域。溶菌酶作為一種糖苷水解酶，可以分解微生物的細(xì)胞壁，使細(xì)菌失去細(xì)胞壁的保護(hù)并在胞內(nèi)高滲透壓的作用下破裂死亡，從而殺滅目標(biāo)微生物。

雞溶菌酶是目前研究最多的溶菌酶，其主要存在于鮮雞蛋的蛋清中，目前雞溶菌酶已經(jīng)實(shí)現(xiàn)商業(yè)化生產(chǎn)。隨著研究和應(yīng)用的深入，人們發(fā)現(xiàn)雞溶菌酶對(duì)部分革蘭氏陽(yáng)性菌（如金黃色葡萄糖球菌）和許多革蘭氏陰性菌（如大腸桿菌）的抑菌效果差，限制了其在許多領(lǐng)域的應(yīng)用。因此提升雞溶菌酶對(duì)不同致病微生物的抑菌效果，具有重要意義。在我們前期的實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)蝎源抗菌肽IsCT具有很好的抑菌效果（專利申請(qǐng)?zhí)朇N104263749A），其能有效抑制大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄糖球菌等致病菌。在此基礎(chǔ)上，本發(fā)明通過理性設(shè)計(jì)將蝎源抗菌肽IsCT的氨基酸序列疊加到雞溶菌酶蛋白的N端獲得了溶菌酶突變體LyIc，有效提升了雞溶菌酶對(duì)常見致病菌（大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄糖球菌）的抑菌特性，為雞溶菌酶的廣泛應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述問題，本發(fā)明公開一種基于標(biāo)簽關(guān)聯(lián)性的多標(biāo)簽文本分類方法，相比原始溶菌酶，本發(fā)明的溶菌酶突變體LyIc對(duì)常見致病菌（大腸桿菌、沙門氏菌、金黃色葡萄糖球菌）的抑菌效果得到有效提升，為雞溶菌酶的廣泛應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。

一種抑菌蛋白，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

一種抑菌蛋白的編碼基因，所述基因包括用于編碼SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的核苷酸序列。

進(jìn)一步的改進(jìn)，所述編碼基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

一種菌株，所述菌株中含有用于編碼SEQ ID NO.2所示氨基酸序列的核苷酸序列。

進(jìn)一步的改進(jìn)，所述菌株為畢赤酵母X33。

一種抑菌蛋白的用途，所述蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示，所述抑菌蛋白用于抑制金黃色葡萄糖球菌、大腸桿菌和沙門氏菌。

進(jìn)一步的改進(jìn)，所述金黃色葡萄糖球菌為金黃色葡萄糖球菌ATCC25923，大腸桿菌為大腸桿菌ATCC25922，沙門氏菌為沙門氏菌ATCC13076。

進(jìn)一步的改進(jìn)，所述抑菌蛋白的使用濃度范圍為0.125mg/mL 至1mg/mL。

進(jìn)一步的改進(jìn)，所述抑菌蛋白的使用濃度1mg/mL。

本發(fā)明相對(duì)于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果：

相比于原始雞溶菌酶，突變體LyIc對(duì)常見致病菌（大腸桿菌、金黃色葡萄糖球菌以及沙門氏菌）的抑菌效果得到有效提升。

附圖說明