[發明專利]生菜作為宿主在表達人乳頭瘤病毒蛋白或制備人宮頸癌疫苗中的應用

在審

• 申請號: 202010214101.4
• 申請日: 2020-03-24
• 公開（公告）號: CN111393511A
• 公開（公告）日: 2020-07-10
• 發明（設計）人: 王躍駒;王海軍;龐小靜
• 申請（專利權）人: 王躍駒
• 主分類號: C07K14/025
• 分類號: C07K14/025;C12N15/82;A61K39/12;A61P35/00
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司 11227
• 代理人: 潘穎

1.植物作為宿主在表達人乳頭瘤病毒蛋白中的應用；所述植物選自生菜、菠菜、番茄、蘿卜、白菜、玉米、大豆、小麥或煙草；所述植物的器官選自種子、葉、根莖或整株植物；

所述人乳頭瘤病毒蛋白包括HPV16 L1、HPV17 L2、HPV1 L1、HPV4 L2或HPV18 L1中的一種或多種。

2.植物作為宿主在制備人宮頸癌疫苗中的應用；所述植物選自生菜、菠菜、番茄、蘿卜、白菜、玉米、大豆、小麥或煙草；所述植物的器官選自種子、葉、根莖或整株植物；

所述人宮頸癌疫苗包括人乳頭瘤病毒蛋白；所述人乳頭瘤病毒蛋白包括HPV16 L1、HPV17 L2、HPV1 L1、HPV4 L2或HPV18 L1中的一種或多種。

3.一種表達載體，其特征在于，包括人乳頭瘤病毒蛋白的核苷酸序列和雙元植物表達載體；

所述人乳頭瘤病毒蛋白包括HPV16 L1、HPV17 L2、HPV1 L1、HPV4 L2或HPV18 L1中的一種或多種。

4.如權利要求3所述的表達載體，其特征在于，所述人乳頭瘤病毒蛋白為HPV16 L1，其cDNA序列如SEQ ID No.3所示，氨基酸序列如SEQ ID No.2所示；或

所述人乳頭瘤病毒蛋白為HPV17 L2，其cDNA序列如SEQ ID No.6所示，氨基酸序列如SEQ ID No.5所示；或

所述人乳頭瘤病毒蛋白為HPV1 L1，其cDNA序列如SEQ ID No.9所示，氨基酸序列如SEQID No.8所示；或

所述人乳頭瘤病毒蛋白為HPV4 L2，其cDNA序列如SEQ ID No.12所示，氨基酸序列如SEQ ID No.11所示；或

所述人乳頭瘤病毒蛋白為HPV18 L1，其cDNA序列如SEQ ID No.15所示，氨基酸序列如SEQ ID No.14所示。

5.根據權利要求3或4所述的表達載體，其特征在于，其構建方法包括如下步驟：

步驟1：在人乳頭瘤病毒(HPV)的核苷酸序列的5’末端加入Xbal限制性酶切位點，在3’末端加入Sacl限制性酶切位點；

步驟2：取步驟1獲得的修飾后的人乳頭瘤病毒的核苷酸序列克隆到載體pUC57載體中，獲得克隆載體pUC-HPVs；

步驟3：通過Xbal/Sacl分別從步驟2所得的克隆載體pUC-HPVs中獲得基因片段HPV，克隆至雙元植物載體pCam35S，獲得表達載體p35S-HPVs。

6.根據權利要求3至5任一項所述的表達載體在表達人乳頭瘤病毒蛋白中的應用。

7.根據權利要求3至5任一項所述的表達載體在制備人宮頸癌疫苗中的應用。

8.植物作為宿主表達人乳頭瘤病毒蛋白的方法，其特征在于，將如權利要求3至5任一項所述的表達載體轉化到農桿菌中，通過農桿菌介導真空滲透入植物組織后，提取、分離蛋白質，獲得人乳頭瘤病毒蛋白；

所述植物選自生菜、菠菜、番茄、蘿卜、白菜、玉米、大豆、小麥或煙草；所述植物的器官選自種子、葉、根莖或整株植物。

9.植物作為宿主制備人宮頸癌疫苗的方法，其特征在于，將如權利要求3至5任一項所述的表達載體轉化到農桿菌中，通過農桿菌介導真空滲透入植物組織后，提取、分離蛋白質，獲得人宮頸癌疫苗。

10.根據權利要求8或9所述的方法，其特征在于，所述農桿菌介導真空滲透包括如下步驟：

步驟1：抽真空25～45s；

步驟2：保持真空-95kPa壓力30～60s；

步驟3：釋放壓力使得滲透液滲入所述植物組織；

重復上述步驟2～3次，避光處理4d。