[發明專利]一種應用流式細胞術檢測血小板抗體特異性的方法及檢測試劑盒

在審

• 申請號: 202010213833.1
• 申請日: 2020-03-24
• 公開（公告）號: CN111175488A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發明（設計）人: 洪建
• 申請（專利權）人: 天津美瑞特醫療科技有限公司
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/543
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• 代理人: 暫無信息

本發明提供了一種應用流式細胞術檢測血小板抗體特異性的方法，包括如下步驟：（1）血小板抗原特異性熒光微球的制備；（2）檢測抗體的制備；（3）血小板對照品的制備（4）檢測反應體系；（5）待測樣本檢測。本發明的另一目的在于提供一種應用流式細胞術檢測血小板抗體特異性的檢測試劑盒，包括由不同的抗血小板特異性糖蛋白抗體包被在不同的熒光微球表面得到的血小板抗原特異性熒光微球、微球緩沖液、血小板對照品、血小板裂解液、清洗液、校準微球以及檢測抗體。所述的血小板特異性抗體檢測方法，解決了現有技術中的血小板抗體檢測主要針對被檢測者自身血小板抗體，并非血漿或血清中游離的血小板抗體的問題，同時可以更近一步地確定被檢測者存在抗體的血小板特異性抗原（HPA）的類型，并且本發明所述方法樣本用量少、結果更加準確、步驟簡單、易操作、效率更高。

技術領域

本發明屬于免疫診斷檢測領域，具體涉及一種應用流式細胞術對血小板抗體特異性進行檢測的方法及檢測試劑盒。

背景技術

血小板抗體是患者在輸血、妊娠或移植等過程中接觸外來血小板抗原所產生的致病性抗體，可致敏血小板并使其遭到破壞，引起血小板減少，導致血小板輸注無效癥（plalelet transfusion refractoriness, PTR），胎母同種異體免疫血小板減少癥（foetal-maternal alloimmune thromLocyte penia, FMAIT），輸血后紫癜（posttransfusion purpura, PTP），以及移植相關同種異體免疫血小板減少癥（transplantation-associated alloimmune thrombocytopenia, TAAT）等多種病癥，患者易出現淤點、瘀斑及出血等癥狀，嚴重者甚至會發生死亡。免疫性疾病患者在機體免疫系統紊亂的情況下亦可產生針對自身血小板的抗體，導致自身免疫性血小板減少癥（idiopathic thrombocytopenia, ITP）。血小板抗體包括HLA I類抗體及抗血小板糖蛋白或HPA抗體。臨床血小板相關免疫性疾病患者體內通常能檢出抗HLA Ⅰ類抗體。但血小板更多的是由抗GP或HPA抗體等多種抗體共同作用，包括抗GP IV、抗GP Ⅱb/Ⅲa、抗GP Ⅰa/Ⅱa、抗GP Ⅰb/Ⅸ、抗CD109抗體等。

流式細胞術是近些年發展起來的新技術，能夠對一個樣本進行多參數高通量檢測，檢測速度快、精度高、準確性好。CBA（cytometric bead array）即微量樣本多指標流式蛋白定量技術，是一種基于流式細胞檢測系統的多重蛋白定量檢測方法，它能夠同時對單個樣品中的多個指標進行檢測。CBA是流式細胞術的進階版，利用微小、分散的顆粒捕獲液體待測物，并利用流式細胞儀檢測類似“三明治”的顆粒—“捕獲微球-待測物-檢測抗體夾心復合物”所散發的熒光，從而測定待測物的數量，這種方法對樣本需求量更少，檢測更快速、更準確。

目前，已有的檢測血小板抗體方法和試劑盒主要針對患者體內的自身血小板抗體，即與患者血小板表面抗原結合的抗體。該檢測方法主要應用在自身免疫性血小板減少癥患者體內的自身血小板抗體檢測，而臨床血小板較少癥患者大多數為同種異體免疫性疾病患者，此類患者也需要檢測的是血液中或血漿中游離的血小板抗體（即非自身血小板抗體）。更進一步的，目前針對被檢測者體內存在具體某種血小板特異性抗原（HPA）的抗體在臨床上的檢測方法更是數量稀少。根據上述情況，需要一種方法檢測被檢測者的血液或血漿中游離的血小板抗體，同時具體到某種HPA的抗體，且該方法需要具有特異性高、靈敏度好、操作簡便、檢測快速等特點。因此，研發一種快速且特異性高的血小板抗體特異性檢測方法及試劑盒具有很大的必要性。。

發明內容

通過本發明所述的檢測方法與試劑盒，能夠快速地檢測出待測樣本中血小板特異性抗體。

為實現上述目的，通過以下方法及步驟實驗：

一種血小板抗體特異性檢測方法，包括如下步驟：

血小板抗原特異性熒光微球的制備