[發明專利]一種快速有效評估體外受精結局的無創檢測方法有效

申請號：	202010212212.1	申請日：	2020-03-24
公開（公告）號：	CN111398190B	公開（公告）日：	2021-08-10
發明（設計）人：	羅孟成;曹羽明;林慧娟;張銘	申請（專利權）人：	武漢大學
主分類號：	G01N21/31	分類號：	G01N21/31;C12N5/076;C12N5/075
代理公司：	湖北武漢永嘉專利代理有限公司 42102	代理人：	鄔麗明
地址：	430072 湖***	國省代碼：	湖北;42
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摘要：
搜索關鍵詞：	一種快速有效評估體外受精結局檢測方法
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【說明書】：

本發明提供一種快速有效評估體外受精結局的無創檢測方法，包括以下步驟：將獲得的精子在培養液中進行精子調配；將調配好的預進行受精的培養液滴入至培養皿中，每個培養皿準備多個預受精培養液滴；將取出的單個卵子分別注入至每個預受精培養液滴中，培養4?5個小時；深入受精滴中吸取部分體積的受精滴，離心，取上清液稀釋；將稀釋后的受精滴利用全自動生化分析儀檢測鈣離子濃度；統計受精滴中鈣離子濃度差異，以此預測0PN結局和/或2PN結局的差異。本研究收集最初4?5小時換液的受精滴（Day 0）進行早期檢測，研究結果可直接預測2PN階段（Day 1）的受精結局，有助于提高臨床早期判斷受精結局，對下一步診治提供指導。

技術領域

本發明涉及臨床輔助生殖技術，特別涉及一種快速有效評估體外受精結局的無創檢測方法。

背景技術

體外受精和胚胎移植(IVF-ET)俗稱“試管嬰兒”。其是一種特殊的臨床輔助生殖技術，需要把精子和卵子在體外的環境下完成受精過程，然后將受精的早期胚胎移植到女性的子宮內，在女性子宮內發育成為胎兒，也就是俗稱的試管嬰兒。在此過程中，是否受精是最初也是最為關鍵的一步，如果可以快速準確的評估受精結局，就能在最佳的時間給予患者補救的措施，從而減少患者的精神及經濟壓力。目前臨床評估受精結局的主要方法是胚胎實驗員通過顯微鏡觀察胚胎發育的形態，在最初的4-5小時可以觀察，如果觀察到2PB的數量超過體外培養數量的三分之一則等待次日繼續動態觀察受精結局，如果觀察到2PB數量小于體外培養數量的三分之一則延長觀察時間至6-8小時，根據觀察結果確定是否需要行早期補救。當在次日觀察到2PN則初步判定受精正常。但目前的體外受精結局的檢測方法是胚胎實驗員對精卵結合情況的實時觀察。胚胎實驗員主要是顯微鏡觀察進行形態學評估，其受觀察者的主觀性影響很大，并且無法檢測到一些隱藏的不能肉眼可見的異常，形態學評分高的胚胎不能代表最佳的發育潛能，所以體外受精結局的預測有限。

發明內容

本發明為解決上述技術問題提供一種快速有效評估體外受精結局的無創檢測方法。

為了實現上述目的，本發明的技術方案如下：

一種快速有效評估體外受精結局的無創檢測方法，包括以下步驟：

將獲得的精子在培養液中進行精子調配；

將調配好的預進行受精的培養液滴入至培養皿中，每個培養皿準備多個預受精培養液滴；

將取出的單個卵子分別注入至每個預受精培養液滴中，培養4-5個小時；

深入受精滴中吸取部分體積的受精滴，離心，取上清液稀釋；

將稀釋后的受精滴利用全自動生化分析儀檢測鈣離子濃度；

統計受精滴中鈣離子濃度差異，以此預測0PN結局和/或2PN結局的差異。

上述方案中，所述檢測鈣離子濃度的方法為偶氮砷III法。

上述方案中，離心步驟具體為在4℃，3000rpm離心5分鐘。