[發(fā)明專利]一種轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白及其在共軛亞油酸生產(chǎn)中的應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010212145.3
• 申請(qǐng)日: 2020-03-24
• 公開（公告）號(hào): CN113061169B
• 公開（公告）日: 2022-09-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳海琴;楊波;高鶴;趙建新;張灝;陳衛(wèi)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號(hào): C07K14/195
• 分類號(hào): C07K14/195;C12N15/31;C12N1/21;C12P7/6431;C12R1/01
• 代理公司: 哈爾濱市陽(yáng)光惠遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 23211
• 代理人: 林娟

本發(fā)明公開了一種轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白及其在共軛亞油酸生產(chǎn)中的應(yīng)用，屬于蛋白質(zhì)工程和微生物工程技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示的轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白可提高共軛亞油酸生產(chǎn)菌株生產(chǎn)共軛亞油酸的產(chǎn)量，將含有本發(fā)明轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白的重組短雙岐桿菌接種至含有亞油酸的培養(yǎng)基中培養(yǎng)72h，即可使培養(yǎng)液中共軛亞油酸的產(chǎn)量高達(dá)0.48mg/mL、轉(zhuǎn)化率高達(dá)96％，其中，cis9,trans11?CLA占培養(yǎng)液中共軛亞油酸總量的96％、trans9,trans11?C占培養(yǎng)液中共軛亞油酸總量的4％。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白及其在共軛亞油酸生產(chǎn)中的應(yīng)用，屬于蛋白質(zhì)工程和微生物工程技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

共軛亞油酸(Conjugated linoleic acid,CLA)是一系列含有共軛雙鍵、具有多種位置和幾何異構(gòu)體的脂肪酸的總稱。研究表明，共軛亞油酸具有緩解心血管疾病、減肥、抗炎癥、緩解糖尿病癥狀等作用，因此，共軛亞油酸被廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥、食品、化妝品等領(lǐng)域。

不同共軛亞油酸異構(gòu)體之間在功能上存在顯著的區(qū)別，其中，cis9,trans11-CLA和trans10,cis12-CLA是公認(rèn)的最具有生理活性的兩種共軛亞油酸異構(gòu)體，因此，市場(chǎng)上對(duì)cis9,trans11-CLA和trans10,cis12-CLA的需求極大。

天然的共軛亞油酸主要存在于瘤胃動(dòng)物、某些植物和海洋生物中，并且，這些天然的共軛亞油酸主要以cis9,trans11-CLA的形式存在，生理活性極高，但是，它們含量極少，難以滿足市場(chǎng)對(duì)于共軛亞油酸的需求。因此，人們逐漸開發(fā)了人工合成共軛亞油酸的方法。

目前，人工合成共軛亞油酸的方法主要有化學(xué)合成法以及微生物合成法。其中，化學(xué)合成法會(huì)導(dǎo)致很多有毒性的副產(chǎn)物的產(chǎn)生，對(duì)環(huán)境以及人體均具有毒害作用，并且，通過(guò)化學(xué)合成法制備得到的共軛亞油酸異構(gòu)體種類多，很難進(jìn)行有效的分離，因此，化學(xué)合成法無(wú)法真正實(shí)現(xiàn)共軛亞油酸的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。與化學(xué)合成法相比，微生物合成法具有污染少、所得共軛亞油酸異構(gòu)體種類單一的優(yōu)點(diǎn)，因此，微生物合成法是一種極具潛力的可實(shí)現(xiàn)共軛亞油酸大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)的方法。

但是，現(xiàn)有的微生物合成法仍存在許多缺陷，其中，產(chǎn)量低是限制微生物合成法的工業(yè)化生產(chǎn)進(jìn)程的缺陷之一，例如，齊慧等人將植物乳桿菌ZS2058接種至含有亞油酸的培養(yǎng)基中培養(yǎng)72h，僅可使發(fā)酵液中共軛亞油酸的轉(zhuǎn)化率達(dá)28.5％(具體可見參考文獻(xiàn)：齊慧,楊波等.植物乳桿菌ZS2058生物轉(zhuǎn)化共軛亞油酸機(jī)理的研究[D],江南大學(xué),2017)；Hennessy等人將長(zhǎng)雙歧桿菌DPC6315接種至含有亞油酸的培養(yǎng)基中培養(yǎng)72h，僅可使發(fā)酵液中共軛亞油酸的轉(zhuǎn)化率達(dá)11.02％(具體可見參考文獻(xiàn)：Hennessy,A.A.,et al.2012.Theproduction of conjugated α-linolemic,γ-linolenic acid and stearidonic acidsby strains of bifidobacterial and propionibacteria,Lipids,47:313-327.)；Coakley等人將動(dòng)物雙歧桿菌Bb12接種至含有亞油酸的培養(yǎng)基中培養(yǎng)72h，僅可使發(fā)酵液中共軛亞油酸的轉(zhuǎn)化率達(dá)27％(具體可見參考文獻(xiàn)：Coakley,M.,et al.2003.Conjugatedlinoleic acid biosynthesis by human-derived Bifidobacterium species,J.Appl.Microbiol.94:138-145.)。

因此，急需找到一種提高共軛亞油酸生產(chǎn)菌株生產(chǎn)共軛亞油酸的產(chǎn)量的方法以克服現(xiàn)有微生物合成法產(chǎn)量低的缺陷。

發(fā)明內(nèi)容

[技術(shù)問(wèn)題]

本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種可提高共軛亞油酸生產(chǎn)菌株生產(chǎn)共軛亞油酸的產(chǎn)量的轉(zhuǎn)錄調(diào)控蛋白。

[技術(shù)方案]