[發(fā)明專利]一種復(fù)合微生物除臭劑及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010202369.6
• 申請(qǐng)日: 2020-03-20
• 公開（公告）號(hào): CN111172087A
• 公開（公告）日: 2020-05-19
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 樊海麟;王維;劉曉竹;鄭海昊;王延偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 樊海麟
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;C12N1/18;B01D53/84;B01D53/48;B01D53/52;B01D53/58;C12R1/25;C12R1/125;C12R1/865
• 代理公司: 北京鼎德寶專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 11823
• 代理人: 牟炳彥

1.一種復(fù)合微生物除臭劑，其特征在于，包括除臭劑和培養(yǎng)基，所述除臭劑包括乳酸菌（95%~98%）、芽孢桿菌（1%~2%）和酵母菌（0.5%~1%），所述培養(yǎng)基包括分離細(xì)菌培養(yǎng)基、分離放線菌培養(yǎng)基、分離酵母菌培養(yǎng)基、分離真菌培養(yǎng)基。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復(fù)合微生物除臭劑，其特征在于，所述微生物除臭劑中的乳酸菌為植物乳桿菌、菌種形態(tài)為桿狀，不產(chǎn)生芽孢，所述芽孢桿菌為枯草芽孢桿菌、菌種形態(tài)為桿狀、產(chǎn)芽孢，無莢膜，所述酵母菌為釀酒酵母、菌種形態(tài)為球型、單細(xì)胞、無鞭毛。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復(fù)合微生物除臭劑，其特征在于，所述分離細(xì)菌培養(yǎng)基采用牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基：牛肉膏3g/L，蛋白胨10g/L，NaCl 5g/L，瓊脂20g/L，PH7.0~7.2，所述分離放線菌培養(yǎng)基采用20%土壤抽提液加2%瓊脂。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復(fù)合微生物除臭劑，其特征在于，所述分離酵母菌培養(yǎng)基采用麥芽汁瓊脂培養(yǎng)基：麥芽汁（5~6°Be′糖度），加入2%瓊脂。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復(fù)合微生物除臭劑，其特征在于，所述分離真菌培養(yǎng)基采用PDA培養(yǎng)基：馬鈴薯200g/L，葡萄糖20g/L，瓊脂20g/L，PH值自然。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復(fù)合微生物除臭劑，其特征在于，包括以下制備步驟：

S1：將養(yǎng)豬場(chǎng)豬舍旁的表層土壤用無菌水稀釋成土壤質(zhì)量濃度為10^-2的溶液，采用平板涂布法將上述溶液分別涂布在不同的固體分離培養(yǎng)基上，置于30℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，5d后，將分離平板中的菌落采用平板稀釋分離法進(jìn)一步純化，將特征不同的菌落分別轉(zhuǎn)移到相應(yīng)的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)后，保存?zhèn)溆茫?/p>

S2：將所有分離得到的菌株，分別接種到相應(yīng)的液體培養(yǎng)基中，置于220r/min搖床上30℃恒溫培養(yǎng)3~7d后，在裝有50g風(fēng)干豬糞的1000mL搪瓷杯中，調(diào)節(jié)豬糞水分為50%左右，按10%（V/V）噴灑培養(yǎng)物，雙層塑料膜密封，30℃恒溫培養(yǎng)，分別在第3、6、9、12、15d后用感官法初步判定微生物的除臭效果，對(duì)有明顯除臭能力的微生物，進(jìn)一步進(jìn)行篩選試驗(yàn)；

S3：將50g拌有5%米糠的風(fēng)干豬糞放入1000mL搪瓷杯中，調(diào)節(jié)含水率到50%左右，121℃下消毒30min，按10%（V/V）噴灑培養(yǎng)物，用雙層塑料膜密封后，置于30℃恒溫室中發(fā)酵培養(yǎng)。每個(gè)菌株設(shè)2個(gè)處理，處理1：在發(fā)酵杯內(nèi)放置一個(gè)裝有20mL10%硼酸溶液的50mL小燒杯，用以吸收氨氣；處理2：放置一個(gè)裝有20mL10%鋅銨絡(luò)鹽溶液的50mL小燒杯，用以吸收硫化氫，均以不接種作空白對(duì)照，每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)，培養(yǎng)過程中每隔5d，取出小燒杯檢測(cè)氨氣和硫化氫的產(chǎn)生量，用以比較菌株抑制臭氣產(chǎn)生的效果；

S4：將篩選出的具有明顯除臭能力的微生物菌種經(jīng)斜面活化后，分別接入相應(yīng)的裝有500mL液體培養(yǎng)基的1000mL三角瓶中，置于220r/min的搖床上，在30℃恒溫條件下培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期(3~7d)。8000rmin下離心25min收獲菌體細(xì)胞，并將其全部轉(zhuǎn)移懸浮到120mL基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，混合備用；

S5：取陶瓷顆粒，蒸餾水洗滌數(shù)次后于110℃恒溫干燥2h，備用。將米糠和陶瓷顆粒按1：20混合均勻，調(diào)節(jié)含水率至45%~50%，121℃下消毒30min，冷卻后與上述混合菌液充分拌勻，即得復(fù)合微生物吸附除臭劑。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種復(fù)合微生物除臭劑的應(yīng)用，其特征在于，包括以下步驟：

S1：用細(xì)鐵絲編做長(zhǎng)、寬、高均為45cm×45cm×5cm的盤18個(gè)，底部鋪普通白紙，將復(fù)合微生物吸附除臭劑攤鋪在盤中的白紙上，平均每個(gè)盤1kg左右；

S2：將上述6個(gè)安裝有復(fù)合微生物吸附除臭劑的盤放置在豬舍內(nèi)，豬舍內(nèi)有6個(gè)豬圈，豬圈大小為3.8m×3.8m，內(nèi)有3月齡生豬6頭。每個(gè)豬圈的天花板上各吊放一個(gè)，共安放6個(gè)，將其余12個(gè)安裝有復(fù)合微生物吸附除臭劑的盤均勻放置在豬場(chǎng)堆肥上方，從堆肥大棚頂部吊下安裝前測(cè)定NH₃、H₂S含量，并用感官判別惡臭程度，作為對(duì)照，5d后再次測(cè)定，考察除臭效果；

S3：采用CD-1大氣采樣器，吸收液10mL(0.005mol/L硫酸)，流量1L/min，采氣30min后立即分析測(cè)定，氨氣采用次氯酸鈉一水楊酸分光光度法測(cè)定，硫化氫采用聚乙烯醇磷酸銨一亞甲基藍(lán)比色法測(cè)定，臭氣濃度指惡臭氣體(異味)用無臭空氣稀釋，稀釋到剛好無臭時(shí)，所需的稀釋倍數(shù)。無臭空氣為經(jīng)過活性炭過濾的空氣，無臭袋為3L聚酯塑料袋，取樣后到實(shí)驗(yàn)室內(nèi)采用注射法稀釋臭氣，使用稀釋倍數(shù)為3，10，30，100，1000，3000，10000的氣袋微生物量(DCW)采用烘干稱重法測(cè)定。