[發(fā)明專利]一種同時(shí)測(cè)定皮膚角質(zhì)層貼片中PCA、t-UCA的分析方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010199150.5
• 申請(qǐng)日: 2020-03-20
• 公開（公告）號(hào): CN111289655B
• 公開（公告）日: 2022-12-30
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 于夢(mèng);孫玲;孟祥璟;段崇剛
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省藥學(xué)科學(xué)院
• 主分類號(hào): G01N30/02
• 分類號(hào): G01N30/02;G01N30/06;G01N30/54;G01N30/74
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一種同時(shí)測(cè)定皮膚角質(zhì)層貼片中PCA、t?UCA的分析方法，其特征是采用稀釋劑對(duì)皮膚角質(zhì)層貼片進(jìn)行前處理后離心，得到上清液，以甲醇和磷酸二氫鉀溶液為流動(dòng)相，在苯基鍵合硅烷的色譜柱上進(jìn)行等度洗脫，采用外標(biāo)法計(jì)算PCA、t?UCA的含量并對(duì)該方法進(jìn)行方法學(xué)驗(yàn)證。本方法能夠有效測(cè)定皮膚角質(zhì)細(xì)胞中的PCA和t?UCA，尤其實(shí)現(xiàn)了在同一色譜條件下PCA和t?UCA與溶劑峰及皮膚中其它成分的分離，在較短時(shí)間內(nèi)對(duì)PCA和t?UCA進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定，靈敏度高，重復(fù)性好。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于分析檢測(cè)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種測(cè)定皮膚角質(zhì)層貼片中PCA、t-UCA的分析方法，實(shí)現(xiàn)了在同一色譜條件下PCA和t-UCA與溶劑峰及皮膚中其它成分的分離，在較短時(shí)間內(nèi)對(duì)PCA和t-UCA進(jìn)行準(zhǔn)確測(cè)定。

背景技術(shù)

吡咯烷酮羧酸(PCA)是一種具有優(yōu)良吸濕性能的天然保濕劑，作為自然保濕因子的最重要的成分大量存在于皮膚角質(zhì)層中。尿刊酸是組氨酸的代謝產(chǎn)物，以反式(t-UCA)存在于皮膚角質(zhì)層中，其作為一種紫外吸收劑，對(duì)皮膚可以起到一定的防護(hù)作用。檢測(cè)皮膚角質(zhì)層中的PCA和t-UCA，可以更好的了解皮膚狀態(tài)，幫助化妝品企業(yè)開發(fā)出更有針對(duì)性的產(chǎn)品。中國(guó)專利申請(qǐng)CN108982716A公開了一種皮膚角質(zhì)層中天然保濕因子的測(cè)定方法，其提取方法較為復(fù)雜，測(cè)定PCA和UCA的方法中，PCA出峰時(shí)間過早，容易與溶劑峰重疊造成測(cè)定不準(zhǔn)確。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種能夠同時(shí)快速、準(zhǔn)確測(cè)定皮膚角質(zhì)層貼片中PCA和t-UCA的方法，可用于了解皮膚狀態(tài)及針對(duì)性皮膚產(chǎn)品的開發(fā)。

為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的技術(shù)方案是：一種同時(shí)測(cè)定皮膚角質(zhì)層貼片中PCA、t-UCA的分析方法，用稀釋劑對(duì)皮膚角質(zhì)層貼片進(jìn)行前處理后離心取上清液，采用反相高效液相色譜法，用苯基鍵合硅膠色譜柱，甲醇-磷酸二氫鉀溶液為流動(dòng)相進(jìn)行等度洗脫。

所述方法中，前處理稀釋劑為磷酸二氫鉀溶液，濃度為0.02mol/L，含庚烷磺酸鈉5mmol/L，磷酸調(diào)節(jié)pH至2.5。

所述流動(dòng)相組成為甲醇-磷酸二氫鉀溶液(3:97)，其中磷酸二氫鉀溶液中含5mmol/L庚烷磺酸鈉，磷酸二氫鉀濃度為0.02mol/L，pH值為2.5。

所述的色譜柱為Thermo BetaBasic Phenyl，250×4.6mm，5μm。

色譜條件包括：檢測(cè)波長(zhǎng)為210nm；流動(dòng)相洗脫速率為1.0mL/min；色譜柱溫度為20℃；樣品進(jìn)樣量為20μL。

本發(fā)明的有益效果是：與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明所述的同時(shí)測(cè)定皮膚角質(zhì)層貼片中PCA和t-UCA的分析方法，前處理方法更為簡(jiǎn)便，分析時(shí)間更短，且可以實(shí)現(xiàn)在同一色譜條件下PCA、t-UCA與溶劑峰及其它皮膚成分色譜峰的較好分離，靈敏度高，重復(fù)性好，可用于皮膚角質(zhì)層中PCA、t-UCA的準(zhǔn)確測(cè)定。

附圖說明

附圖1對(duì)照品圖譜

附圖2皮膚角質(zhì)層貼片樣品圖譜

附圖3空白溶劑圖譜

附圖4空白貼片圖譜

具體實(shí)施方式

以下結(jié)合具體實(shí)施例進(jìn)一步描述本發(fā)明的技術(shù)方案，給出的實(shí)施例僅為了闡明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。

綜合考慮PCA、t-UCA的紫外吸收情況，本試驗(yàn)選擇在兩者吸收都較強(qiáng)的210nm處進(jìn)行測(cè)定。試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，PCA在C18柱上保留較差，調(diào)整流動(dòng)相比例，改變緩沖鹽類型，調(diào)整pH值以及加入離子對(duì)試劑后等措施均無法實(shí)現(xiàn)PCA與溶劑峰的有效分離。考慮到苯基柱對(duì)有共軛體系的成分的選擇性較好，改用苯基柱進(jìn)行試驗(yàn)。加入離子對(duì)試劑并調(diào)整pH值，以達(dá)到盡量延長(zhǎng)PCA的保留時(shí)間，使其與溶劑峰及皮膚貼片的未知雜峰分離的同時(shí)，盡量縮短分析時(shí)間。實(shí)施例1PCA、t-UCA的高效液相色譜分析