[發明專利]一種抗腫瘤巨噬細胞的制備方法

在審

• 申請號: 202010198030.3
• 申請日: 2020-03-19
• 公開（公告）號: CN111647560A
• 公開（公告）日: 2020-09-11
• 發明（設計）人: 鄭俊武;金紅林;萬超;黃浩;鄭成武;衛路;洪磊;金秀妍;劉群
• 申請（專利權）人: 武漢圣潤生物科技有限公司
• 主分類號: C12N5/0786
• 分類號: C12N5/0786;C12N5/0775;A61K39/00;A61P35/00
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 周瓊

本發明公開了一種抗腫瘤巨噬細胞的制備方法，包括以下步驟：獲得原代骨髓干細胞或分離外周血中單核細胞進行原代細胞培養，加入集落刺激因子7天后獲得巨噬細胞；獲得離體腫瘤細胞進行原代腫瘤細胞培養，并獲得原代腫瘤細胞；將得到的原代腫瘤細胞及培養液進行放療照射，收集放療后的上清液，獲得所需微顆粒和凋亡的腫瘤細胞碎片混合物；將得到的混合物進行離心，即得到所述攜帶腫瘤抗原微顆粒；將得到的微顆粒處理步驟1獲得的原代巨噬細胞，即得到所述抗腫瘤巨噬細胞。該抗腫瘤巨噬細胞的制備方法，實現個性化治療，制備出可針對患者不同的腫瘤抗原的巨噬細胞；制備工藝簡單，較易生產。

技術領域

本發明涉及抗腫瘤領域，更特別地，涉及一種抗腫瘤巨噬方法的制備方 法。

背景技術

巨噬細胞是免疫反應中的下游效應關鍵的執行者，腫瘤微環境中，巨噬 占50％以上，更重要的是巨噬細胞的比例與腫瘤的預后呈負相關，進一步說 明了巨噬細胞在腫瘤中的重要性。腫瘤組織浸潤區的巨噬細胞(Tumor Associated Macrophages，TAMs)促進了腫瘤的進展，腫瘤細胞通過高表達 CD47和巨噬細胞表面的SIRPα結合，直接導致腫瘤細胞不僅可以和腫瘤細胞 和諧共處，而且還會通過促進腫瘤內血管的增殖，抑制效應T細胞等促進腫 瘤的擴增和生長。以往針對巨噬細胞的應用集中在抑制單核細胞在腫瘤微環 境分化為腫瘤相關巨噬細胞、殺傷腫瘤相關巨噬細胞以及促進微環境中TAMs 重編程為M1等，但清除巨噬細胞會抑制全身免疫反應，使機體易感染。由此 我們提出回輸特異性抗腫瘤巨噬細胞從而發揮抑制腫瘤生長的效果。

微顆粒由腫瘤細胞所釋放，經放療、雙氧水或過氧化氫處理的腫瘤細胞 釋放更多攜帶腫瘤抗原的微顆粒，此種微顆粒可以促進巨噬細胞向M1極化， 增強巨噬細胞對腫瘤細胞的吞噬，也可協同效應T細胞發揮抗腫瘤效果。

發明內容

為解決以上問題，本發明提供了一種抗腫瘤巨噬細胞的制備方法，該抗 腫瘤巨噬細胞通過直接吞噬腫瘤和激活T細胞發揮抗腫瘤效應，解決常規化 療效果差、副作用大、易產生耐藥性的技術問題并實現個體化治療。

本發明是由以下技術手段實現的：

一種抗腫瘤巨噬細胞的制備方法，包括以下步驟：

步驟1、獲得原代骨髓干細胞或分離外周血中單核細胞進行原代細胞培 養，加入集落刺激因子7天后獲得巨噬細胞；

步驟2、獲得離體腫瘤細胞進行原代腫瘤細胞培養，并獲得原代腫瘤細胞；

步驟3、將所述步驟2得到的原代腫瘤細胞及培養液進行放療照射，收集 放療后的上清液，獲得所需微顆粒和凋亡的腫瘤細胞碎片混合物；

步驟4、將所述步驟3得到的混合物進行離心，即得到所述攜帶腫瘤抗原 微顆粒；

步驟5、將所述步驟4得到的微顆粒處理步驟1獲得的原代巨噬細胞，即 得到所述抗腫瘤巨噬細胞。

所述的巨噬細胞可來源于人體外周血分離所得淋巴細胞

所述攜帶腫瘤抗原的微顆粒來源于自體來源的腫瘤細胞或腫瘤細胞系產 生的腫瘤細胞。

所述離體腫瘤細胞來自于實體瘤。

一種抗腫瘤巨噬細胞的制備方法制得的抗腫瘤巨噬細胞，所述抗腫瘤巨 噬細胞為M1促炎巨噬細胞；所述抗腫瘤巨噬細胞表面CD86和MHCⅡ高表 達，胞內CD206低表達；所訴抗腫瘤巨噬細胞具有更強吞噬腫瘤細胞的能力。

一種抗腫瘤巨噬細胞的制備方法制得的抗腫瘤微巨噬細胞在抗腫瘤療法 中的應用。

本發明具有以下優點：

①實現個性化治療，制備出可針對患者不同的腫瘤抗原的巨噬細胞；

②制備工藝簡單，較易生產；