[發(fā)明專利]一種經(jīng)基因工程改造的抗腫瘤微顆粒的制備方法及應用在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010197091.8 | 申請日： | 2020-03-19 |
| 公開（公告）號： | CN111420031A | 公開（公告）日： | 2020-07-17 |
| 發(fā)明（設計）人： | 鄭俊武;金紅林;萬超;黃浩;鄭成武;衛(wèi)路;洪磊;金秀妍;劉群 | 申請（專利權(quán)）人： | 武漢圣潤生物科技有限公司 |
| 主分類號： | A61K38/19 | 分類號： | A61K38/19;A61K9/50;A61K47/46;A61K45/06;A61P35/00;A61P35/04;B82Y5/00;C12N5/10;C12N15/867 |
| 代理公司： | 上海精晟知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31253 | 代理人： | 周瓊 |
| 地址： | 430000 湖北省武漢市東湖新技術(shù)開*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 基因工程 改造 腫瘤 顆粒 制備 方法 應用 | ||
1.一種經(jīng)基因工程改造的抗腫瘤微顆粒的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
S1、構(gòu)建過表達GM-CSF和跨膜過表達GM-CSF的質(zhì)粒；
S2、獲得離體腫瘤細胞進行原代腫瘤細胞培養(yǎng)，并獲得原代腫瘤細胞；
S3、包裝過表達GM-CSF和跨膜過表達GM-CSF的慢病毒顆粒；
S4、用慢病毒顆粒對所述步驟S2得到的原代腫瘤細胞進行感染，得到過表達GM-CSF和跨膜過表達GM-CSF的原代腫瘤細胞；
S5、將所述S4得到的原代腫瘤細胞及培養(yǎng)液進行X線照射，收集放療后的上清液，獲得所需微顆粒和凋亡的腫瘤細胞碎片混合物；
S6、將所述S5得到的混合物進行離心，即得到所述基因工程改造的抗腫瘤微顆粒。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種經(jīng)基因工程改造的抗腫瘤微顆粒的制備方法，其特征在于，S6中所述離心包括依次進行第一離心、第二離心、第三次離心，所述第一離心的轉(zhuǎn)速為1000g，時間為10分鐘，得上清；第二離心的轉(zhuǎn)速為14000g，時間為2分鐘，得上清；第三次離心的轉(zhuǎn)速為14000g，時間為60分鐘，得沉淀即為微顆粒。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種經(jīng)基因工程改造的抗腫瘤微顆粒的制備方法，其特征在于，所述S5的X線放射劑量為5-20Gy，X線能量為6MV，上清液收集時間為放療后的第2-7天。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種經(jīng)基因工程改造的抗腫瘤微顆粒的制備方法，其特征在于，所述離體腫瘤細胞為自體來源的腫瘤細胞或腫瘤細胞系產(chǎn)生的腫瘤細胞。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種經(jīng)基因工程改造的抗腫瘤微顆粒的制備方法，其特征在于，所述離體腫瘤細胞來自于實體瘤。
6.權(quán)利要求1-5任意一項所述的一種經(jīng)基因工程改造的抗腫瘤微顆粒的制備方法，其特征在于，其制得的抗腫瘤微顆粒，經(jīng)基因工程改造的抗腫瘤微顆粒為攜載GM-CSF的微囊泡結(jié)構(gòu)，所述微囊泡結(jié)構(gòu)的粒徑為100-1000nm。
7.一種經(jīng)基因工程改造的抗腫瘤微顆粒藥劑，其特征在于，由權(quán)利要求1-5中任一項所述的經(jīng)基因工程改造的抗腫瘤微顆粒通過純化和濃縮而獲得。
8.權(quán)利要求1-5所述的任意一項所述的一種經(jīng)基因工程改造的抗腫瘤微顆粒的制備方法制得的經(jīng)基因工程改造的抗腫瘤微顆粒在制備抗腫瘤藥物中的應用。
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