[發(fā)明專利]一種海鱸仔魚細胞系的構建方法

在審

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• 申請日: 2020-03-19
• 公開（公告）號: CN111411073A
• 公開（公告）日: 2020-07-14
• 發(fā)明（設計）人: 黃友華;黃曉紅;秦啟偉;魏京廣;周勝
• 申請（專利權）人: 華南農業(yè)大學
• 主分類號: C12N5/071
• 分類號: C12N5/071;C12R1/91
• 代理公司: 廣州三環(huán)專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 顏希文

1.一種海鱸仔魚細胞系的構建方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)原代培養(yǎng)：將海鱸仔魚組織進行胰酶消化獲得細胞懸浮液，加入原代細胞培養(yǎng)液培養(yǎng)原代細胞；

(2)傳代培養(yǎng)：傳代1-10代時，傳代細胞培養(yǎng)液中的胎牛血清濃度為20％；傳代11-20代時，傳代細胞培養(yǎng)液中的胎牛血清濃度為15％；傳代20代以后，傳代細胞培養(yǎng)液中的胎牛血清濃度為10％；

(3)收集傳代細胞，獲得所述海鱸仔魚細胞系。

2.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述海鱸仔魚選自孵化3-4天的海鱸仔魚。

3.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述原代細胞培養(yǎng)液和傳代細胞培養(yǎng)液采用的基礎培養(yǎng)基均為L-15培養(yǎng)基。

4.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述原代培養(yǎng)包括以下步驟：將海鱸仔魚組織經胰酶消化獲得的細胞懸浮液，離心，收集沉淀，加入原代細胞培養(yǎng)液重懸沉淀，移入培養(yǎng)瓶中，28℃培養(yǎng)，每隔2-3天按半量換液方式更換培養(yǎng)液，10天后開始傳代培養(yǎng)。

5.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述傳代1-10代時，傳代細胞培養(yǎng)液的配方為：基礎培養(yǎng)基L-15中包含20％的胎牛血清、0.266％的NaCl、5mM的HEPES、400IU/ml青霉素、400μg/ml鏈霉素和400μg/ml制霉菌素，培養(yǎng)基pH值為7.2-7.4。

6.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述傳代11-20代時，傳代細胞培養(yǎng)液的配方為：基礎培養(yǎng)基L-15中包含15％的胎牛血清、0.266％的NaCl、5mM的HEPES、200IU/ml青霉素、200μg/ml鏈霉素和200μg/ml制霉菌素，培養(yǎng)基pH值為7.2-7.4。

7.如權利要求1所述的構建方法，其特征在于，所述傳代20代以后，傳代細胞培養(yǎng)液的配方為：基礎培養(yǎng)基L-15中包含10％的胎牛血清、0.266％的NaCl、5mM的HEPES、100IU/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素，培養(yǎng)基pH值為7.2-7.4。

8.一種海鱸仔魚細胞系，其特征在于，采用如權利要求1～7任一項所述的構建方法制備而成。

9.如權利要求8所述的海鱸仔魚細胞系在表達外源基因中的應用。

10.如權利要求8所述的海鱸仔魚細胞系在病毒感染中的應用。