[發明專利]一種同時檢測9種豬病原體的微流體芯片

在審

• 申請號: 202010196399.0
• 申請日: 2020-03-19
• 公開（公告）號: CN111500767A
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發明（設計）人: 謝榮輝;徐輝;趙靈燕;王雅婷;張紅麗;馮肖肖;柴娟;周蕾;吳贇竑
• 申請（專利權）人: 浙江省動物疫病預防控制中心
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6837;C40B40/06;C12N15/11
• 代理公司: 北京高沃律師事務所 11569
• 代理人: 呂紀濤

本發明提供了一種同時檢測9種豬病原體的微流體芯片，屬于基因工程技術領域，將豬瘟病毒引物探針、豬偽狂犬病毒引物探針、豬嵴病毒引物探針、豬細小病毒I型引物探針、豬細小病毒Ⅳ型引物探針、豬流行性乙型腦炎病毒引物探針、美洲型豬繁殖與呼吸綜合征病毒引物探針、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒引物探針、豬圓環病毒2型引物探針包被在微流體芯片上。芯片的敏感性：豬瘟病毒10拷貝、豬偽狂犬病毒100拷貝、豬嵴病毒100拷貝、豬細小病毒I型100拷貝，豬細小病毒IV型100拷貝，豬乙型腦炎病毒100拷貝，豬圓環病毒2型100拷貝，高致病性豬豬繁殖與呼吸綜合征病毒100拷貝，美洲型豬繁殖與呼吸綜合征病毒10拷貝。

技術領域

本發明屬于基因工程技術領域，尤其涉及一種同時檢測9種豬病原體的微流體芯片。

背景技術

豬瘟病毒、豬細小病毒、豬偽狂犬病毒、豬圓環病毒、豬繁殖和呼吸綜合征病毒、高致病性豬繁殖和呼吸綜合征病毒、豬流行性乙型腦炎病毒等9種病原體嚴重危害著重養豬業，快速、準確對該類豬病原體進行鑒別診斷，有助于動物疫病的預防和控制，對畜牧業的健康發展具有積極的意義。

目前用于豬瘟病毒、豬細小病毒、豬狂偽犬病毒、豬圓環病毒、豬繁殖和呼吸綜合病毒、高致病性豬繁殖和呼吸綜合病毒、豬流行性乙型腦炎病毒的實驗室方法主要為PCR和熒光定量PCR方法，盡管二者的檢測速度、靈敏度和特異性較傳統的病毒培養及抗原檢測的方法有了明顯提高，但鑒于病毒種類繁多，當前臨床應用中的PCR和熒光定量PCR檢測方法單次只能檢測單一或三種以內的豬病毒，無法同時對上述多種豬病毒進行篩查，若要篩查上述豬病原體必須通過多次熒光定量PCR或PCR方法檢測后才能明確，費時費力，并且浪費樣本。

發明內容

有鑒于此，本發明的目的在于提供一種同時檢測9種豬病原體的微流體芯片，采用本發明提供的微流體芯片能夠同時檢測9種豬病原體。

為了實現上述發明目的，本發明提供了以下技術方案：

本發明提供了一種同時檢測9種豬病原體的微流體芯片，將豬瘟病毒引物探針、豬偽狂犬病毒引物探針、豬嵴病毒引物探針、豬細小病毒I型引物探針、豬細小病毒Ⅳ型引物探針、豬流行性乙型腦炎病毒引物探針、美洲型豬繁殖與呼吸綜合征病毒引物探針、高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒引物探針、豬圓環病毒2型引物探針包被在微流體芯片上；

所述豬瘟病毒引物探針的上游引物、下游引物和探針的核苷酸序列依次如SEQ IDNo.1～3所示；

所述豬偽狂犬病毒引物探針的上游引物、下游引物和探針的核苷酸序列依次如SEQ ID No.4～6所示；

所述豬嵴病毒引物探針的上游引物、下游引物和探針的核苷酸序列依次如SEQ IDNo.7～9所示；

所述豬細小病毒I型引物探針的上游引物、下游引物和探針的核苷酸序列依次如SEQ ID No.10～12所示；

所述豬細小病毒Ⅳ型引物探針的上游引物、下游引物和探針的核苷酸序列依次如SEQ ID No.13～15所示；

所述豬流行性乙型腦炎病毒引物探針的上游引物、下游引物和探針的核苷酸序列依次如SEQ ID No.16～18所示；

所述美洲型豬繁殖與呼吸綜合征病毒引物探針的上游引物、下游引物、探針的核苷酸序列依次如SEQ ID No.19～21所示；

所述高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒引物探針的上游引物、下游引物、探針的的核苷酸序列依次如SEQ ID No.22～24所示；

所述豬圓環病毒2型引物探針的上游引物、下游引物和探針的核苷酸序列依次如SEQ ID No.25～27所示。

優選的，所述豬瘟病毒引物探針的探針的5'端添加FAM，3'端添加QSY1。