[發明專利]仿細胞結構納米材料及其制備方法和應用

在審

• 申請號: 202010195491.5
• 申請日: 2020-03-19
• 公開（公告）號: CN111494639A
• 公開（公告）日: 2020-08-07
• 發明（設計）人: 劉中民;樂文俊;陳炳地;吳敏靚;梅天笑;李會一;張一帆
• 申請（專利權）人: 上海市東方醫院（同濟大學附屬東方醫院）
• 主分類號: A61K47/42
• 分類號: A61K47/42;A61K47/04;A61K47/02;A61K45/00;A61P35/00;A61P31/12;A61P31/04;C07K1/14
• 代理公司: 南京經緯專利商標代理有限公司 32200
• 代理人: 余俊杰

1.仿細胞結構納米材料的制備方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟：

(1)培養目標細胞，細胞狀態基本要求：細胞活力高于60％，細胞純度大于80％，細胞數目在1-25×10⁷個/次，備用；

(2)取步驟(1)目標細胞在室溫下2000rmp條件下離心棄上清，沉淀采用細胞膜提取裂解液重懸、并在冰上勻漿處理，2000rmp離心、收集上清液，沉淀采用細胞膜提取裂解液重懸；

(3)重復步驟(2)中的離心和重懸步驟，直至沒有完整細胞；

(4)混合步驟(2)和步驟(3)收集的上清液，采用蔗糖-殼聚糖密度梯度離心得到純化的細胞膜；

(5)取步驟(4)離心后每層樣本，分析樣本中的蛋白成分，用生理鹽水稀釋膜富集區域，4℃、20000g離心0.5小時，低壓凍干、稱重、加PBS、4℃儲存；

(6)對步驟(5)儲存的細胞膜進行蛋白定量分析，其中膜脂質質量濃度與膜蛋白質量濃度之比為1:4-3:1時，取與膜脂質濃度相等的經過表面等離子共振技術進行親水化修飾的介孔納米材料或負載目標物質的多功能介孔納米材料加入細胞膜溶液中，在超聲和0-4℃條件下反應1-12小時，9000rpm離心去除未結合的細胞膜，制得仿細胞結構納米材料。

2.根據權利要求1所述的仿細胞結構納米材料的制備方法，其特征在于，步驟(1)中目標細胞為腫瘤細胞、血球細胞、細菌或真菌。

3.根據權利要求1所述的仿細胞結構納米材料的制備方法，其特征在于，步驟(2)中細胞數目在1-25×10⁷個/次，且兩次離心的時長均為5min。

4.根據權利要求1所述的仿細胞結構納米材料的制備方法，其特征在于，步驟(2)中的細胞膜提取裂解液的配方為：20mM蔗糖，1mM殼聚糖，1mM NaOH、1mM Tris/HCl，0.1mM PMSF，胰蛋白酶抑制劑100μg/mL，RNase 5μg/mL，DNase 5μg/mL終濃度，pH 7.4。

5.根據權利要求1所述的仿細胞結構納米材料的制備方法，其特征在于，步驟(4)中采用蔗糖-殼聚糖密度梯度離心的具體方法為：將混合后的上清液倒入不連續蔗糖-殼聚糖密度梯度液中，蔗糖-殼聚糖密度梯度液濃度w/v分別為60％、45％和25％；然后4℃、20000g離心30min，收集蔗糖-殼聚糖密度梯度液45％/25％交界處的樣本。

6.根據權利要求1所述的仿細胞結構納米材料的制備方法，其特征在于，步驟(6)中的介孔納米材料為：介孔二氧化硅、介孔硅、介孔碳、金屬氧化物、金屬硫化物、有機聚合物、有機-無極雜化、金屬中的至少一種；介孔納米材料負載的目標物質為：抗腫瘤藥物、抗病毒藥物、抗細菌藥物、生物活性物質中的至少一種。

7.由權利要求1-6任一所述方法制備獲得的仿細胞結構納米材料。

8.權利要求7所述仿細胞結構納米材料在制備抗腫瘤、抗病毒或抗細菌藥物的遞送載體中的應用。