[發明專利]一種用于哺乳仔豬的無抗發酵軟顆粒教槽料制備方法

在審

• 申請號: 202010195489.8
• 申請日: 2020-03-19
• 公開（公告）號: CN111264686A
• 公開（公告）日: 2020-06-12
• 發明（設計）人: 陳曉安;王剛
• 申請（專利權）人: 湖南粒豐生物科技有限公司
• 主分類號: A23K10/12
• 分類號: A23K10/12;A23K50/30;A23K50/60;C12N1/20;C12N1/16;C12R1/125
• 代理公司: 長沙智德知識產權代理事務所(普通合伙) 43207
• 代理人: 盧鐘廷

1.一種用于哺乳仔豬的無抗發酵軟顆粒教槽料制備方法，其特征在于，是由以下方法制備的：

S1、菌種選擇：乳桿菌、枯草芽胞桿菌、酵母菌為湖南省微生物研究院動物營養實驗室保存；

S2、菌種活化：將步驟S1中所選取的乳酸菌涂布于MRS瓊脂固體培養基中，37℃恒溫培養24h，挑取有溶鈣圈的菌落，反復劃線分離純菌株，得到乳酸菌菌株，備用；

將步驟S1中所選的枯草芽胞桿菌涂布于牛肉膏蛋白胨瓊脂固體培養基中，37℃恒溫培養36h，反復劃線分離純菌株，得到枯草芽孢桿菌菌株，備用；

將步驟S1中所選的酵母菌接種到土豆瓊脂固體培養平板上以30℃的溫度培養3d，挑取單菌落進一步用平板劃線法純化2-3次，得到酵母菌菌株，然后將其放于4℃冰箱中保存備用；

S3、種子液制備：用MRS培養基培養步驟S2所得的乳酸菌菌株，得到乳酸菌發酵種子液；用NA培養基培養步驟S2所得的枯草芽孢桿菌菌株，得到枯草芽孢桿菌發酵種子液；用PDA培養基培養步驟S2所得的酵母菌菌株，得到酵母菌發酵種子液；

S4、擴大培養：將步驟S3所得的乳酸菌、枯草芽胞桿菌、酵母菌均以5％的接種比例擴培到擴大培養基中，乳酸菌培養基為2％紅糖，0.1％的蛋白棟，0.01％的磷酸二氫鉀；枯草芽胞桿菌為牛肉膏蛋白胨培養基(NA)；酵母菌為土豆培養基(PDA)；

S5、混菌發酵：將步驟S4所得的乳酸菌擴大培養液、芽孢桿菌擴大培養液、酵母菌擴大培養液，將其各自菌體濃度均調整至10¹⁰cfu/mL，而后將乳酸菌：酵母菌：枯草芽胞桿菌＝3％：2％：1％體積比混合，得到混合菌液；取不含有抗生素和化學藥物的哺乳仔豬顆粒教槽料，與所述混合菌液按1:0.8體積比用電動噴槍將混合菌液噴灑到無抗顆粒教槽料上，PH值為6.5，而后裝袋密封，置于溫度為35℃，發酵3d，即得到所述用于哺乳仔豬的無抗發酵軟顆粒教槽料。

2.根據權利要求1所述的用于哺乳仔豬的無抗發酵軟顆粒教槽料制備方法，其特征在于，步驟S5中所述哺乳仔豬顆粒教槽料由以下重量份的成分組成：粒度為0.4mm玉米粉65份，次面2份，粒度為0.4mm豆粕15份，膨化大豆5份，魚粉2.1份，麩皮8份，賴氨酸鹽酸鹽0.3份，蛋氨酸0.02份，甜菜堿0.05份，食鹽0.3份，石粉1份，磷酸氫鈣0.8份，植酸酶0.02份，甜味劑0.03份，仔豬多維0.04份，有機多礦0.3份，50％的氯化膽堿0.1份，混合均勻后通過膨化制粒機制成2.0mm的顆粒大，備用。

3.根據權利要求1所述的用于哺乳仔豬的無抗發酵軟顆粒教槽料制備方法，其特征在于，步驟S2－S4中所述MRS培養基的配制方法：蛋白胨10.0g，吐溫-80 1.0ml，牛肉提取物10.0g，檸檬酸氫二銨2.0g，葡萄糖5.0g，乙酸鈉5.0g，酵母提取物5.0g，MgSO₄·7H₂O 0.2g，MgSO₄·H₂O 0.05g，K₂HPO₄ 2.0g，蒸餾水補足1000mL，用NaOH調PH為6.5，121℃，滅菌20min。

4.根據權利要求1所述的用于哺乳仔豬的無抗發酵軟顆粒教槽料制備方法，其特征在于，步驟S2－S4中所述NA培養基的配制方法：牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl 5g，葡萄糖20g，蒸餾水補足1000mL，121℃，滅菌20min。

5.根據權利要求1所述的用于哺乳仔豬的無抗發酵軟顆粒教槽料制備方法，其特征在于，步驟S2－S4中所述PDA培養基的配制方法：土豆(去皮)200g，葡萄糖20g，蒸餾水補足1000mL，121℃，滅菌20min。

6.根據權利要求1所述的用于哺乳仔豬的無抗發酵軟顆粒教槽料制備方法，其特征在于，步驟S2中所述MRS瓊脂固體培養基的配制方法：1000mlMRS培養基中添加2％的瓊脂粉，121℃，滅菌20min。