[發明專利]一種基于反相二維液相色譜的煙堿旋光異構體分離測定方法

有效

• 申請號: 202010194212.3
• 申請日: 2020-03-19
• 公開（公告）號: CN111398494B
• 公開（公告）日: 2022-07-12
• 發明（設計）人: 朱瑞芝;司曉喜;王凱;蔣薇;劉志華;張鳳梅;何沛;楊繼;李振杰;向能軍;劉春波;唐石云
• 申請（專利權）人: 云南中煙工業有限責任公司
• 主分類號: G01N30/14
• 分類號: G01N30/14;G01N30/46
• 代理公司: 北京市領專知識產權代理有限公司 11590
• 代理人: 陳有業

本發明公開了一種基于二維液相色譜的煙堿旋光異構體分離測定方法，包括以下步驟：①樣品前處理；②樣品檢測；③S?(?)?煙堿和R?(+)?煙堿的定量測定。本發明的分離測定方法首次采用了反相二維液相色譜體系，穩定性大大提高；本發明還提供了一種含煙堿的樣品或純煙堿樣品中煙堿來源的輔助識別方法。

技術領域

本發明屬于分析化學領域，具體涉及一種基于反相二維液相色譜的煙堿旋光 異構體分離測定方法。

背景技術

煙堿是煙草和煙氣中含量最豐富的生物堿，是煙草最重要的生理性活性成 分。煙堿分子含有一個手性中心，有兩個旋光體：S-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿，兩者 在煙草中含量、代謝機理和生理特性完全不同。已報道的煙堿手性分離方法主要 有毛細管電泳法、核磁共振法(NMR)、高效液相色譜法(HPLC)、氣相色譜 (GC)及其聯用法等。

煙堿旋光異構體的構成比例是煙草特征性成分之一。2018年發布了煙草行 業標準YC/T 561—2018《煙草特征性成分煙堿旋光異構體比例的測定高效 液相色譜法和超高效合相色譜—串聯質譜法》，推薦了兩種煙堿旋光異構體比例 的測定方法，即正相手性柱分離的高效液相色譜法和超高效合相色譜—串聯質譜 法。這兩種測定方法的色譜體系受試劑和環境中水分影響較大，保留時間不穩定； 同時由于液相色譜方法反相色譜和正相色譜之間溶劑體系切換所需時間長，而且 對儀器穩定性影響較大，不利于實驗室多種方法的開展和儀器維護。另外，由于 煙堿兩個對映體含量差別較大，對測定方法的靈敏度要求較高，對于較為復雜的 基質，有效排除雜質干擾是方法準確度的保證；標準所推薦的兩種測定方法難以 達到要求。

為解決上述問題提出本發明。

發明內容

本發明首次提出了基于反相二維液相色譜分離煙草及煙草制品中煙堿的旋 光異構體的測定方法。通過在一維柱中對煙堿的富集、凈化和精準切割，再在二 維液相中進行手性分離，有效解決了煙草復雜基質的干擾，方法穩定性好，靈敏 度高，適用于富雜基質中煙堿的旋光異構體的分離和測定。

本發明的技術方案如下：

本發明第一方面公開了一種基于二維液相色譜的煙堿旋光異構體分離測定 方法，包括以下步驟：

①樣品前處理：將樣品加入適量甲醇中萃取，取上層清液得待測液；

②樣品檢測：將步驟①得到的待測液進行反向二維液相色譜檢測，采用峰面 積歸一化法測定待測液中的堿旋光異構體即S-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿的相對含量；

③S-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿的定量測定：配制標準工作溶液，建立S-(-)-煙堿 和R-(+)-煙堿建立線性回歸方程，對待測液中S-(-)-煙堿和R-(+)-煙堿進行準確的 定量分析。

優選地，所述的樣品包括煙葉、煙絲、傳統卷煙、加熱卷煙、電子煙煙油 或煙草提取物中的一種。

優選地，步驟①中的煙草樣品與甲醇的固液比為1:10～1:200(g:mL)， 萃取方式為振蕩萃取、超聲萃取中的一種，萃取時間為10～180min。

優選地，步驟②中液相色譜條件如下：

一維色譜柱：Agilent InfinityLab Poroshell HPH-C18，(4.6*50mm，2.7μm)； 流速1mL/min；流動相A：50mmol/L的醋酸銨溶液；流動相B：甲醇；梯度洗 脫，洗脫順序見下表：

梯度洗脫順序

定量環，40～500μL；

二維液相色譜柱：Agilent InfinityLab Poroshell Chiral-T，(4.6*150mm，2.7um)；流動相包括：甲醇＝45v/v％，乙腈＝55v/v％；流速1mL/min。