[發明專利]一株協同產三種抗細菌代謝產物枯草芽孢桿菌JCL16及其篩選和應用

有效

• 申請號: 202010193730.3
• 申請日: 2020-03-17
• 公開（公告）號: CN111411053B
• 公開（公告）日: 2023-02-17
• 發明（設計）人: 羅楚平;管明;強曉剛;陳樹橋;王小花;仲海靜;劉佳琛;楊雪婷;游慶紅;尹秀蓮;李相前
• 申請（專利權）人: 淮陰工學院;淮安市水產技術指導站
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/02;C12P17/02;C12P21/02;A61K35/742;A61P31/04;A23K50/80;A23K10/18;A01K61/13;C12R1/125
• 代理公司: 南京蘇高專利商標事務所(普通合伙) 32204
• 代理人: 孫斌

本發明公開了一株協同產三種抗細菌代謝產物枯草芽孢桿菌JCL16及其篩選和應用，該協同產三種抗細菌代謝產物菌株JCL16，經鑒定為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，已保藏于中國典型微生物保藏中心，保藏時間為2018年06月01日，保藏編號為CCTCC NO:M2018336。本發明的枯草芽孢桿菌JCL16可以產生三種抗細菌代謝產物分別為：表面活性素Surfactin、溶桿菌素Bacilysin、和SubtilosinA；對加州鱸魚的病害具有優異的防治效果，尤其是鰤魚諾卡氏菌導致的加州鱸魚病害，可用于制成相關的生物制劑和飼料。

技術領域

本發明屬于水產養殖病害防治，涉及一株協同產三種抗細菌代謝產物枯草芽孢桿菌JCL16及其篩選和應用，還涉及菌株JCL16產表面活性素，溶桿菌素和SubtilosinA對鰤魚諾卡氏菌病的防治作用及其在飼料中的應用。

背景技術

加州鱸魚，學名為大口黑鱸(Micropterus salmoides，Lacepèe 1802)，屬鱸形目、鱸亞目、太陽魚科、黑鱸屬，原產為美國加州密西西比河水系。加州鱸魚主要棲息于混濁度低，且有水生植物分布的水域中，由于其肉質鮮美、生長迅速、易于捕撈，在我國的養殖面積大幅擴增，成為重要的經濟魚類。

鰤魚諾卡氏菌在水、土壤及活性污泥中分布十分廣泛，人和動物在一定條件下均可染病。鰤魚諾卡氏菌在幼魚初期感染后通常無明顯表征，難以及時發現。感染和發病機制漫長，典型癥狀和顯著性危害通常在成魚期呈現。鰤魚諾卡氏菌病在魚體內的生長繁殖速度很慢，所以其病程很長，尤其在出現癥狀或引起魚死亡之前需要很長增殖發育期和漫長的病程。養殖的魚群感染鰤魚諾卡氏菌后的會導致產量大大降低，飼料轉化很低，死亡率增高，在夏末收獲的魚體況不佳，十分瘦弱。傳播疾病的方式多樣化，小魚初期可能由于冰鮮餌料感染或者與病魚感染傳播感染鰤魚諾卡氏菌，和病魚或被感染魚一起飼養也是感染原因之一。

芽孢桿菌是一類具有重要使用價值以及經濟價值的微生物，其種類豐富，分布廣泛，產生多種生物活性物質。芽孢桿菌是革蘭氏陽性細菌，能夠產生靜止的芽孢以度過惡劣的環境。由于芽孢具有非常強的抗逆性，使其在運輸或儲藏過程中不容易失活，因而芽孢桿菌是一種較為理想的生物農藥。其次，芽孢桿菌營養需求簡單、生長速度快，這使得其生產發酵的成本較低，有利于開發成生防菌劑。最為重要的是，大量芽孢桿菌還能夠產生多種次級代謝產物，是抗菌活性物質的重要來源。芽孢桿菌的生態適應性良好，可以和多種微生物競爭，有助于控制病原菌，其效果持久、爭對性強，展現出良好的應用前景。若能從湖泊、池塘等土壤中分離獲得的對加州鱸魚病具有拮抗作用的芽孢桿菌，對鰤魚諾卡氏菌的防治具有重要意義。

發明內容

發明目的：針對現有技術存在的問題，本發明提供一株協同產三種抗細菌代謝產物的菌株JCL16，經鑒定為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，本發明的枯草芽孢桿菌JCL16可以產生三種抗細菌代謝產物分別為：表面活性素Surfactin、溶桿菌素Bacilysin、和SubtilosinA；對加州鱸魚諾卡式菌病有優異的防治效果。

本發明還提供菌株JCL16的篩選和應用。

技術方案：為了實現上述目的，如本發明所述的一株協同產三種抗細菌代謝產物的菌株JCL16，經鑒定為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)，已保藏于中國典型微生物保藏中心，保藏地址：中國.武漢.武漢大學，郵編：430072，保藏時間為2018年06月01日，保藏編號為CCTCC NO:M2018336。該菌株JCL16來源于淮安市水產養殖所土壤中，無菌操作觀察培養基上單個菌落的形態，枯草芽孢桿菌JCL16在LB培養基上為圓形，暗白色，不透明，邊緣整齊。

其中，所述三種抗細菌代謝產物分別為：表面活性素Surfactin、溶桿菌素Bacilysin、和SubtilosinA。

本發明所述的協同產三種抗細菌代謝產物的菌株JCL16的篩選方法，包括如下步驟：