[發明專利]一種CRISPR-based核酸檢測試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 202010190545.9
• 申請日: 2020-03-18
• 公開（公告）號: CN111378786A
• 公開（公告）日: 2020-07-07
• 發明（設計）人: 顏菁;楊朝;代田純
• 申請（專利權）人: 上海邦先醫療科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/6844;C12R1/93
• 代理公司: 蘇州創元專利商標事務所有限公司 32103
• 代理人: 周敏;汪青

本發明涉及一種CRISPR?based核酸檢測試劑盒及SHERLOCK CRISPR系統在病原體檢測中的應用，所述的核酸檢測試劑盒包括針對病原體的gRNA序列。本發明的試劑盒及檢測方法快速準確、靈敏度高、便攜、方便運輸、可實現冷凍運輸，價格低廉，整個檢測時間在2小時以內；檢測的準確性與PCR平臺一致；檢測靈敏度在1?1000copies/μl；從而使其能夠大規模推廣應用，能夠在疫情爆發初期對當地居民，特別是落后地區的居民，實現實時實地的快速檢測，最大程度遏止病毒的傳播。

技術領域

本發明具體涉及一種CRISPR-based核酸檢測試劑盒及其應用。

背景技術

目前肺炎病原體的檢測主要依靠PCR技術及其他以PCR為基礎的技術，PCR相關檢測技術存在快速準確、靈敏度高等優點，因此是最常用的病毒檢測方法，也是目前病毒檢測的金標準。但是，目前主流的PCR檢測平臺，都需要專業的儀器設備和相關技術人員，限制了其大規模推廣應用，特別是在邊遠落后地區的應用。例如，近期在武漢爆發的新型冠狀病毒，具有極強的傳染性和致病性，嚴重威脅人類的生命和財產安全。目前對于新型冠狀病毒及其他病毒的檢測，主要依靠PCR技術及其他以PCR為基礎的技術。而由于PCR，需要專業的設備和相關技術人員，檢測費用相對較高，因此，在落后地區無法使用，導致某些地區新冠的確診難度增大，不利于疫情的控制

發明內容

本發明所要解決的技術問題是提供一種CRISPR-based核酸檢測試劑盒及其應用，該試劑盒基于CRISPR核酸檢測技術。

為解決以上技術問題，本發明采取如下技術方案：

本發明一方面提供一種CRISPR-based核酸檢測試劑盒，所述的核酸檢測試劑盒包括針對病原體的gRNA序列。

優選地，所述的病原體包括肺炎病原體。

優選地，所述的病原體包括新型冠狀病毒COVID-19以及其他病毒。

優選地，所述的核酸檢測試劑盒包括針對一種或多種病原體設計的gRNA序列。

優選地，所述的核酸檢測試劑盒包括針對每種病原體的一個或多個基因設計的一個或多個gRNA序列。

優選地，所述的核酸檢測試劑盒還包括Cas13a蛋白和/或探針。

本發明的第二方面提供一種SHERLOCK CRISPR系統在病原體檢測中的應用，檢測時采用所述的CRISPR-based核酸檢測試劑盒。

本發明的第三方面提供一種利用SHERLOCK CRISPR系統及所述的CRI SPR-based核酸檢測試劑盒進行病原體檢測的方法，包括如下步驟：

(1)對待測樣本進行預處理；

(2)通過RPA擴增及轉錄；

(3)加入Cas13a蛋白、gRNA序列以及探針進行檢測。

優選地，進行所述的檢測時，采用酶標儀檢測熒光信號，或者，基于鏈霉親和素反應進行檢測。

優選地，所述的待測樣本為體液。

本發明的試劑盒和檢測方法對儀器的依賴程度低，甚至可以實現無需儀器的試紙條檢測。

由于以上技術方案的實施，本發明與現有技術相比具有如下優點：

本發明的試劑盒及檢測方法快速準確、靈敏度高、便攜、方便運輸、可實現冷凍運輸，價格低廉，整個檢測時間在2小時以內；檢測的準確性與PCR平臺一致；檢測靈敏度在1-1000copies/μl；從而使其能夠大規模推廣應用，能夠在疫情爆發初期對當地居民，特別是落后地區的居民，實現實時實地的快速檢測，最大程度遏止病毒的傳播。

具體實施方式