[發(fā)明專(zhuān)利]紫外光激發(fā)熒光染料及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 202010189742.9
• 申請(qǐng)日: 2020-03-18
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN111393872B
• 公開(kāi)（公告）日: 2022-05-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王曉飛;毛飛
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 寶天生物科技（上海）有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C09B69/10
• 分類(lèi)號(hào): C09B69/10;C09K11/06;G01N33/53
• 代理公司: 上海愉騰專(zhuān)利代理事務(wù)所(普通合伙) 31306
• 代理人: 唐海波

本發(fā)明公開(kāi)了一種紫外光激發(fā)熒光染料及其應(yīng)用，具體涉及通式(Ⅰ)化合物，式中各基團(tuán)如文中所述，本發(fā)明還涉及該染料?偶聯(lián)物，以及應(yīng)用在抗體檢測(cè)上。本發(fā)明的熒光染料同時(shí)存在活性基團(tuán)和水溶性聚合物基團(tuán)，該熒光染料可以被405nm激光激發(fā)，且具有很好的水溶性、顯著降低對(duì)生物活性的影響和在較短波長(zhǎng)內(nèi)具有較高的熒光信號(hào)的效果。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及熒光染料，特別涉及紫外光激發(fā)熒光染料及其應(yīng)用，特別是其在神經(jīng)病理學(xué)、免疫學(xué)、病理學(xué)和蛋白質(zhì)組學(xué)上的應(yīng)用。

背景技術(shù)

隨著新的顯微技術(shù)的發(fā)展和各種合成及天然熒光分子的出現(xiàn)，熒光顯微技術(shù)已經(jīng)成為細(xì)胞生物學(xué)的基礎(chǔ)工具。熒光標(biāo)記的目標(biāo)分子或細(xì)胞器可以用來(lái)研究細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能。熒光染料可以作為示蹤劑使用熒光顯微鏡對(duì)生物結(jié)構(gòu)進(jìn)行定位，使用熒光免疫方法對(duì)分析物進(jìn)行定量，使用流式細(xì)胞儀對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分析，細(xì)胞物理狀態(tài)的測(cè)定及其他應(yīng)用。與其它類(lèi)型吸收染料相比，熒光染料通常靈敏度高，并且其吸收波長(zhǎng)與發(fā)射波長(zhǎng)是不同，一般通過(guò)光學(xué)激發(fā)來(lái)檢測(cè)熒光發(fā)射，在大部分生物學(xué)樣品中具有較低的熒光背景，其固有的光學(xué)性質(zhì)例如熒光極性，熒光壽命和激發(fā)態(tài)能量轉(zhuǎn)移均是可以進(jìn)行測(cè)定的。目前熒光染料廣泛應(yīng)用于對(duì)病人的生理學(xué)功能進(jìn)行日常檢查或疾病診斷過(guò)程，也可以同步監(jiān)控暴露在環(huán)境中的有害化學(xué)物質(zhì)例如毒素或致癌農(nóng)藥，或者空氣、泥土或飲用水中的有害無(wú)機(jī)物質(zhì)對(duì)工人的影響，確定藥物療效，掃描新化合物對(duì)特殊酶的促進(jìn)或抑制作用，監(jiān)控基因和轉(zhuǎn)基因表達(dá)，以及一些其他生物學(xué)應(yīng)用例如免疫酶聯(lián)反應(yīng)和蛋白質(zhì)印跡法(Western Blots)。

在研究和診斷過(guò)程中，需要對(duì)有機(jī)化合物、生物化合物和生物分析物進(jìn)行快速高效的檢測(cè)或定量。特別需要提供一種用來(lái)檢測(cè)少量核酸、多肽、藥物、新陳代謝產(chǎn)物和微組織的方法。例如用于治療目的需要對(duì)麻醉劑、中毒、藥物情況進(jìn)行了解，還需要了解激素、病理學(xué)微組織、病毒、抗體、酶和核酸等所反應(yīng)出的疾病狀態(tài)，光學(xué)方法檢測(cè)(熒光發(fā)射，紫外吸收，比色法)用于監(jiān)測(cè)和測(cè)量熒光，是一種傳統(tǒng)并且高效的檢測(cè)，這些方法可以通過(guò)直接觀察或者儀器檢測(cè)來(lái)定性或定量檢測(cè)所需要的信息。

使用熒光染料作為示蹤劑，一般需要將染料和生物活性配體如細(xì)胞、組織、蛋白、抗體、藥物、酶、激素、核酸、多糖、脂類(lèi)或者其他生物分子之間形成化學(xué)共價(jià)鍵或者將染料與自然或人工合成聚合物(載體分子)相連制成合成探針(熒光探針/染料-偶聯(lián)劑)，使用這些合成探針(熒光探針/染料-偶聯(lián)劑)，生物分子一般會(huì)發(fā)生生物化學(xué)變化，合成探針(熒光探針/染料-偶聯(lián)劑)可以對(duì)這種變化提供定性或定量檢測(cè)。

紫外激發(fā)具有其固有的弱點(diǎn)，如會(huì)造成光漂白和會(huì)對(duì)標(biāo)記物造成損害等，但是在多色熒光應(yīng)用中，如免疫熒光，核酸，蛋白質(zhì)組，原位雜交和神經(jīng)追蹤中，藍(lán)色熒光探針可以與綠色、黃色、橙色和紅色熒光探針(染料-偶聯(lián)劑)明顯區(qū)分。

半導(dǎo)體激光器又稱(chēng)二極管，是以半導(dǎo)體材料為工作物質(zhì)的一類(lèi)激光器件，是成熟較早、進(jìn)展較快的一類(lèi)激光器，由于它的波長(zhǎng)范圍寬，制作簡(jiǎn)單、成本低、易于大量生產(chǎn)，并且由于其具有體積小、重量輕、壽命長(zhǎng)等特點(diǎn)，因此，品種發(fā)展快、應(yīng)用范圍廣和易于與各種光電子器件實(shí)現(xiàn)電子集成，如405nm的激光器。目前，能被405nm激光激發(fā)的合適染料則屈指可數(shù)，如Cascade Blue，Cascade Yellow和Pacific Blue和Pacific Orange等。為了在生物學(xué)應(yīng)用中減少聚集，大部分染料中均含有磺酸基團(tuán)，雖然磺化可減少二聚體的形成和增加染料的水溶性，但也在生物分子中引入了負(fù)電荷，因此可能增加破壞標(biāo)記生物分子的生物學(xué)活性的風(fēng)險(xiǎn)。