[發明專利]弓形蟲轉化培養液以及體外弓形蟲轉化培養方法有效
| 申請號: | 202010188232.X | 申請日: | 2020-03-17 |
| 公開(公告)號: | CN111440726B | 公開(公告)日: | 2021-08-20 |
| 發明(設計)人: | 張慧;鄒繼彬;冉靈芝;武闖 | 申請(專利權)人: | 中國科學院大學深圳醫院(光明) |
| 主分類號: | C12N1/10 | 分類號: | C12N1/10 |
| 代理公司: | 深圳中細軟知識產權代理有限公司 44528 | 代理人: | 彭佳偉 |
| 地址: | 518106 廣東省深*** | 國省代碼: | 廣東;44 |
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| 摘要: | |||
| 搜索關鍵詞: | 弓形蟲 轉化 培養液 以及 體外 培養 方法 | ||
1.一種弓形蟲轉化培養液,其特征在于,由以下組成:1wt%的DMEM粉末、1wt%的人磷脂酰絲氨酸、2mM的L-谷氨酰胺、1wt%的胎牛血清、20mM的4-羥乙基哌嗪乙磺酸以及5μM的甲磺酸去鐵胺,用超純水定容至500mL,所述弓形蟲轉化培養液的pH為8.1。
2.一種體外弓形蟲轉化培養方法,其特征在于,包括如下步驟:
提供貼壁生長的宿主細胞;
向所述宿主細胞中加入新濾過的弓形蟲蟲體培養液,2h~12h后,移除所述弓形蟲蟲體培養液,并且用緩沖液清洗所述宿主細胞表面;以及
移除所述緩沖液,并且向所述宿主細胞中加入如權利要求1所述的弓形蟲轉化培養液,保持所述宿主細胞處于缺氧氛圍并且將所述宿主細胞置于37℃的恒溫培養箱中孵育,完成所述弓形蟲的轉化培養,其中,所述孵育的操作中,保持所述弓形蟲轉化培養液的pH為8.1。
3.根據權利要求2所述的體外弓形蟲轉化培養方法,其特征在于,所述宿主細胞的密度為80%~90%,所述緩沖液為PBS緩沖液。
4.根據權利要求2所述的體外弓形蟲轉化培養方法,其特征在于,所述37℃的恒溫培養箱中孵育的操作為:37℃的恒溫培養箱中孵育2天~4天,每天更換兩次所述弓形蟲轉化培養液,保持所述弓形蟲轉化培養液的pH為8.1不變。
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