[發明專利]一種促進乳酸菌快速分泌抗菌肽的方法

在審

• 申請號: 202010187838.1
• 申請日: 2020-03-17
• 公開（公告）號: CN111304273A
• 公開（公告）日: 2020-06-19
• 發明（設計）人: 鐘亮;徐健;雷勇;尹修權
• 申請（專利權）人: 廣州正明生物科技有限公司
• 主分類號: C12P39/00
• 分類號: C12P39/00;C12P21/00;C07K1/14;C07K1/34;C07K1/36;C12R1/42;C12R1/01
• 代理公司: 廣州正明知識產權代理事務所(普通合伙) 44572
• 代理人: 張麗

本發明屬于抗菌肽制備技術領域，具體涉及一種促進乳酸菌快速分泌抗菌肽的方法，為開發一種縮短乳酸菌抗菌肽生產周期并提高其得率的方法，在乳酸菌的培養穩定期加入沙門氏菌，利用乳酸菌對沙門氏菌的競爭抑制作用，使乳酸菌在沙門氏菌的刺激下產生大量的抗菌肽，然后經過分離提取后得到乳酸菌抗菌肽，該方法工藝簡單，可有效的降低生產成本和勞動強度，既提高了乳酸菌產生抗菌肽的產率，又大大縮短了培養周期。

技術領域

本發明屬于抗菌肽制備技術領域，具體涉及一種促進乳酸菌快速分泌抗菌肽的方法。

背景技術

細菌能夠合成各式各樣的抗菌肽，又被稱作細菌素。細菌素主要是通過在靶細胞膜上形成孔道，從而造成內容物外泄或各種平衡機制失調，選擇性抑菌或殺菌可保護腸道優勢菌群。乳酸菌是目前世界公認安全的食品級微生物，乳酸菌在代謝過程產生很多抗菌物質，主要包括酸性物質、乳酸菌抗菌肽、過氧化氫等，可有效抵抗食物變質和食源性病原微生物。近幾年，乳酸菌對其他細菌的拮抗作用的機理研究得最多的是乳酸菌抗菌肽。乳酸菌抗菌肽是在乳酸菌代謝過程中，合成并分泌到環境中的一類對革蘭氏陽性菌(尤其是親緣性較近的細菌)具有抑制作用的殺菌蛋白或多肽。乳酸菌抗菌肽可作為天然的食品防腐劑直接應用于食品工業，可以防止食品中腐敗菌和病原菌的生長，作為一類天然食品防腐劑和飼料添加劑有著非常廣闊的開發應用前景。

但是乳酸菌在自然條件或舒適條件下產生抗菌肽的周期長，且得率低。因此，有必要開發一種縮短乳酸菌抗菌肽生產周期并提高其得率的方法。

發明內容

為了克服上述現有技術的不足，本發明所要解決的技術問題是提供一種促進乳酸菌快速分泌抗菌肽的方法，該方法不僅提高了乳酸菌產生抗菌肽的產率，而且大大縮短了培養周期。

為實現上述目的，本發明所采用的技術方案為：

一種促進乳酸菌快速分泌抗菌肽的方法，該方法為：在乳酸菌發酵過程中加入沙門氏菌，待發酵液中不再有沙門氏菌活菌后停止培養，對最終發酵產物進行分離提取抗菌肽即可。

本發明通過在乳酸菌發酵過程中加入一定量的沙門氏菌，創造惡劣的培養環境，同時保證乳酸菌處于優勢狀態，讓乳酸菌和沙門氏菌形成競爭關系，乳酸菌在沙門氏菌的刺激下，會產生大量的抗菌肽，以保證自身競爭優勢和生長，每隔一段時間檢測培養基中沙門氏菌的數量，待檢測不到沙門氏菌時，停止培養，經過分離提取得到乳酸菌抗菌肽，從而既縮短了抗菌肽的制備周期，也提高了其產率。

優選的，具體是在乳酸菌發酵培養至穩定期中期時加入沙門氏菌。穩定期中期時乳酸菌的生長最穩定，此時加入沙門氏菌不會對其正常生長發育造成不利影響。

優選的，所述沙門氏菌的加入量為乳酸菌初始菌量的20％-40％。此時乳酸菌和沙門氏菌形成競爭關系，并保證乳酸菌處于優勢狀態。

優選的，所述乳酸菌為乳酸乳球菌。

優選的，所述分離提取抗菌肽的過程包括以下步驟：

S1、收集最終發酵產物進行離心，保留上清液；

S2、對步驟S1的上清液進行分離提純后得到含抗菌肽的濃縮液。

優選的，步驟S2所述分離提純采用透析濃縮法。

優選的，將步驟S2的含抗菌肽的濃縮液干燥處理成抗菌肽干粉。

更優選的，往步驟S2的含抗菌肽的濃縮液中添加麥芽糊精混勻后再干燥處理成抗菌肽干粉。具體的，所述麥芽糊精為質量濃度為25％的麥芽糊精溶液，所述麥芽糊精溶液的添加體積為含抗菌肽的濃縮液體積的2-3％。麥芽糊精是一種賦型劑，有利于抗菌肽干粉的定型和保存。

與現有技術相比，本發明的有益效果是：