[發(fā)明專利]突變的米曲霉菌株在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 202010187442.7 | 申請日： | 2020-03-17 |
| 公開（公告）號： | CN113403242A | 公開（公告）日： | 2021-09-17 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 吳偉;戴小軍;曹海生;牛其文 | 申請（專利權(quán)）人： | 豐益（上海）生物技術(shù)研發(fā)中心有限公司 |
| 主分類號： | C12N1/21 | 分類號： | C12N1/21;C12N9/20;C12N15/80;C12R1/69 |
| 代理公司： | 中國專利代理(香港)有限公司 72001 | 代理人： | 李波;梅黎 |
| 地址： | 200137 上海市浦*** | 國省代碼： | 上海;31 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 突變 曲霉 菌株 | ||
本發(fā)明涉及突變的米曲霉菌株。具體地，本發(fā)明涉及突變的米曲霉(
技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，更具體涉及突變的米曲霉菌株和采用該菌株得到的重組菌株、生物催化劑等，以及用該菌株生產(chǎn)外源蛋白的方法。
背景技術(shù)
米曲霉 (
米曲霉是一種能產(chǎn)復(fù)合酶，包括淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、果膠酶、植酸酶等的菌株，且米曲霉還具有高效的蛋白分泌表達(dá)能力。米曲霉表達(dá)外源蛋白具有表達(dá)量大、胞外分泌率高、蛋白質(zhì)分子折疊和修飾系統(tǒng)接近高等真核細(xì)胞等特點(diǎn)，且表達(dá)的外源蛋白具有天然活性。另外，米曲霉還能進(jìn)行各種翻譯后加工，如糖基化修飾蛋白酶切割和二硫鍵的形成等（Meyer V. Genetic engineering of filamentous fungi-progress, obstacle andfuture trends. Biotechnol Adv, 2008, 26(2):177-185）。因而，利用米曲霉作為表達(dá)菌株來表達(dá)同源和異源蛋白日益受到重視。
在工業(yè)生產(chǎn)過程中，米曲霉表達(dá)異源蛋白相較于同源蛋白時，表達(dá)水平較低（張建軍，蔡容華，李強(qiáng)，等. 提高蛋白質(zhì)在米曲霉中表達(dá)量的策略. 中國生物工程雜志，2009，29(1) : 111-115）。通常可以采取構(gòu)建自身蛋白酶缺陷株、使用強(qiáng)啟動子、融合表達(dá)等策略增強(qiáng)外源蛋白在米曲霉中的表達(dá)。但蛋白酶缺陷菌株一般會影響菌株的生長速度，不利于工業(yè)生產(chǎn)，而融合表達(dá)在食品用酶生產(chǎn)過程中可能存在法規(guī)風(fēng)險，所以使用強(qiáng)啟動子的策略一般較為常用。
另外合適的篩選標(biāo)記是表達(dá)系統(tǒng)重要的組成部分。米曲霉中的營養(yǎng)缺陷型篩選標(biāo)記目前使用最多的是硝酸鹽還原酶營養(yǎng)缺陷型( niaD - ) 轉(zhuǎn)化系統(tǒng)和乳清酸核苷-5'磷酸脫羧酶營養(yǎng)缺陷型( pyrG - ) 轉(zhuǎn)化系統(tǒng)（于瀟淳，馬世良. 米曲霉外源表達(dá)系統(tǒng)研究進(jìn)展.中國生物工程雜志，2016，36(9) : 94-100）。但是由于米曲霉的菌絲是多核有隔的而絕大部分分生孢子也是多核的，所以使得誘變或基因改造的效率大打折扣，增加了轉(zhuǎn)化系統(tǒng)的建立難度（Jun-ichi MARUYAMA., Visualization of Nuclei in
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